大肠杆菌T蛋白的高效表达和分离纯化

摘要:目的　构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T 蛋白,为后续的新药作用靶点研究提供活性蛋白质材料。方法　利用高效表达质粒p ET26b + 克隆了大肠杆菌TyrA 基因,并在其C 端融合了一个由6 个组氨酸组成的his2tag 以利分离纯化。结果　T 蛋白的表达量达每1 L 培养液200 mg ,细胞裂解液经一次his2tag 亲和柱色谱,纯度达98 % ,分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶的比活性分别为130 和98 U·mg - 1 。结论　本法表达的大肠杆菌T 蛋白,表达量高,纯化容易,酶活性正常,为进一步研究T 蛋白的结构与功能,并进行新药设计奠定了基础。