常用血细胞化学染色12

二、氯乙酸AS-D荼盼醋酶染色

染色原理

血细胞内的氯乙酸AS-D荼酚酯酶(naphythol AS-D chloroacetate esterase, NAS-DCE)水解基质液中的氯乙酸AS-D荼酚，产生AS-D荼酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。

试剂器材

1.10%甲醛甲醇固定液

甲醛 25mL

甲醇 75mL

混合后置4℃冰箱保存。

2.Veronal醋酸缓冲液

甲液：

醋酸钠(含3H2O) 1.94g

巴比妥钠 2.94g

蒸馏水 100mL

乙液：

0.1mol/L盐酸 取盐酸(比密1.190g/L)0.85mL加蒸馏水至100mL。

取甲液50mL，乙液45mL，再加蒸馏水135mL，用1mol/L盐酸调pH至7.5~7.6。

3.基质液

氯乙酸AS-D荼酚 100mg

丙酮 0.5mL

蒸馏水 5mL

Veronal醋酸缓冲液 5mL

固酱紫GBC盐 10 mg

不必过滤立即染色，一次用完。

4.苏木素染液。

操作步骤

1.固定新鲜干燥的涂片在固定液中30 s~1min，蒸馏水冲洗，待干。

2.显示放入基质液(37℃)30min，自来水冲洗。

3.复染苏木素染液复染5mn，自来水冲洗，待干，镜检。

注意事顶

1.冬季室温低，茶酚和固酱紫GBC盐不易溶解，可放37℃温箱促溶。

2.茶酚在丙酮中溶解后再加其他液体。

3.NAS-DCE不被氟化钠抑制。

4.此酶染色后的标本易脱色，不能长期保存。

实验评价

NAS-DCE阳性反应几乎仅出现在粒细胞、较POX染色更具有特异性，因此又称为"粒细胞酯酶"、"特异性酯酶"。故该酶较特异地识别粒细胞系，有助于急粒和急单的鉴别，特别是对某些POX反应较强的单核细胞白血病鉴别意义更大。