异柠檬酸脱氢酶测定实验

异柠檬酸脱氢酶（NADP⁺），异柠檬酸：NADP⁺ 氧化还原酶（脱羧）。

D-异柠檬酸 + NADP⁺ → CO₂ + 2-酮戊二酸 + NADPH + H⁺

这里所描述的实验步骤用 NADP，可以用 NAD 来代替，也可以用异柠檬酸脱氢酶（NAD ⁺），异柠檬酸：NAD ⁺ 氧化还原酶（脱羧）来代替。

异柠檬酸脱氢酶溶液

咪唑-HCl NADP MgCl2 异柠檬酸溶液

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 酶溶液

25℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.1 mol/l 咪唑-HCl，pH 8.0

0.01 mol/l NADP（Mr=787.4；79 mg 溶于10 ml 水中）

0.1 mol/l MgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr=203.3；203 mg 溶于10 ml 水中）

0.025 mol/l 异柠檬酸溶液（异柠檬酸，三钠盐，Mr=258.1；65 mg 溶于 10 ml 水中）

异柠檬酸脱氢酶（原料溶液，10 mg/l，使用前稀释 100 倍）