我国学者通过RIGI敲除293T细胞获得有效的干扰素敏感疫苗

　　甲型流感病毒感染严重威胁全球公共健康并造成重大经济损失，而疫苗仍是防控流感最有效的手段。干扰素敏感（IFN -sensitive）和复制缺陷（replication-incompetent）流感疫苗因其在正常细胞中无法进行有效复制，却能够诱导机体产生强烈的免疫反应而备受关注，这类疫苗被认为将很有可能替代传统的灭活疫苗和减毒疫苗。非结构蛋白1（NS1）是甲型流感病毒的致病因子之一，在病毒的生命周期中发挥着多种重要作用，尤其是能够通过抑制RIG-I介导的I型IFN的产生来拮抗宿主的天然免疫反应。IFN敏感疫苗正是利用这一理论依据，将流感病毒的IFN拮抗功能去除，从而抑制病毒在体内的有效复制。目前主要使用IFN-α/β缺陷的Vero细胞或IFN功能低下的低日龄SPF鸡胚来繁殖此类疫苗病毒，但仍然无法满足此类疫苗病毒的生产需求。

　　刘文军课题组长期从事流感病毒的复制调控机制研究，前期围绕流感病毒NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫反应的机制开展了系列研究工作（Journal of Virology,2016,90:6263– 6275；Cellular Microbiology,2017,19(2),e12643）。而该研究则利用NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫的功能，制备了有限复制流感疫苗并建立了生产该类疫苗的细胞系。

　　该研究利用反向遗传技术在RIG-I敲除的293T细胞中成功包装出NS1蛋白38位和41位氨基酸双突变（NS1 R38A/K41A）的重组流感病毒，其包装效率要远远高于其在野生型293T细胞中的效率。并且，该重组病毒几乎丧失了IFN拮抗功能，在MDCK、A549甚至IFN-α/β缺陷的Vero细胞中传3-6代后即被细胞清除。为了能够大量生产此类有限复制的IFN敏感流感病毒，该团队利用Tet-On 3G系统建立了稳定表达野生型NS1蛋白的Vero细胞系，NS1 R38A/K41A病毒在该细胞系上能够稳定传20代以上并保持较高的病毒滴度。动物实验表明，NS1 R38A/K41A病毒能够感染小鼠并诱导强烈的天然免疫和获得性免疫，并抵抗A/WSN/33 (WSN)、A/Puerto Rico/8/1934 (PR8)和 A/California/04/2009 (CA04)流感病毒的再次攻击，但NS1 R38A/K41A病毒的致病力几乎丧失，并很快被排出体外。

　　综上所述，RIG-I敲除的293T细胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的包装，稳定表达NS1的Vero细胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的有效复制，该系统可以用于包装并生产有限复制的IFN敏感疫苗病毒。NS1 R38A/K41A流感病毒在正常细胞和小鼠体内的复制是有限的，是一种潜在的安全有效的干扰素敏感疫苗。

　　上述研究于2018年5月1日在线发表在 Frontiers in Cellular and Infection Microbiology上。该研究得到国家重点研发计划、国家自然科学基金及中国科学院B类先导科技专项等项目的资助。

Immunogenicity and protective efficiency of the NS1 R38A/K41A virus. Sera of WT or NS1 R38A/K41A virus infected mice (n = 6) was collected at 3, 7, and 14 d p.i.