本生详解抗体的制备方法与原理

　抗血清的制备

　　有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。

　　(一)用于免疫的动物

　　作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，-好为雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，-好用纯种新西兰兔，组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

　　(二)免疫途径

　　免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，般不宜采用静脉注射。

　　(三)佐剂

　　由于不同个体对同抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

　　佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

　　常用的佐剂是福氏佐剂(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9(V/V)，这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。

　　配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液(其中加卡介苗3～4mg/ml或不加)，加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用注射器装抗原液，另注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中注射器作注射用。

　　(四)免疫方法

　　抗原剂量，次剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为次剂量为1/4左右。每2～3周加强免疫次。加强免疫时用不完全佐剂，次免疫时皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必注射百日咳疫苗。

　　在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价(见后)。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止(图2-3)。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。