杂色云芝漆酶的分离、纯化和酶学特性研究

摘 要：杂色云芝发酵液，经超滤、DEAE-Sephadex A250 柱层析两步分离、纯化出两型漆酶。以愈创木酚与酶带在适当条件下反应呈棕红色谱带鉴定出漆酶谱带。两型漆酶分别命名为LacA 和LacB。经测定两漆酶亚基的分子量分别为66.0kDa 和30.7kDa；等电点pI 分别为4.79 和5.18；LacA 的最适作用温度是40℃，LacB 为50℃；保温2h, LacA的半失活温度为60℃，LacB 为90℃；LacA 和LacB 催化愈创木酚的酶活最适pH 值均为4.0； 二者的稳定pH 值也都在2.5~5.5 之间。LacA 催化氧化愈创木酚的Km 和Vmax 分别为286.5μmol×L-1 和292.4nmol× mL-1× min -1；LacB 催化氧化愈创木酚的Km 和Vmax 分别为813.0μmol × L-1 和127.4nmol × mL-1× min-1。