构建高产谷胱甘肽啤酒酵母基因工程菌提高啤酒抗老化能力的研究

摘　要　根据同源重组的原理,将来源于啤酒酵母工业菌株G03 的γ2谷氨酰半胱氨酸合成酶基因( GSH1) 和筛选标记Kan 取代质粒pRJ25 中18S rDNA 内部约340bp 的DNA 片段,构建重组质粒pRKG。以pRKG为模版,PCR 得到以18S rDNA 为整合位点包含GSH1 和Kan 的基因片段18S rDNA: : ( Kan2GSH1) 。用此片段转化啤酒酵母工业菌株G03 ,通过G418 抗性筛选得到啤酒酵母工程菌。实验室小试表明,工程菌的谷胱甘肽含量比受体菌株提高1616 % ,啤酒的抗老化能力得到了显著提高,而常规指标没有发生显著变化。连续传代5 次后胞内GSH含量基本不变遗传稳定性良好。由于表达γ2谷氨酰半胱氨酸合成酶的基因来源于受体菌株自身,是通过自克隆技术改造工业啤酒酵母的一次有益的尝试。