发布时间:2019-04-11 18:18 原文链接: 染色体显带实验_显G带法2

实验方法原理常用的显带方法,有操作简便、经济和能长期保存的优点,有关G带显示法在文献中报道极多,但不一定都能重复出满意的效果,可能与各研究室所用材料条件有关,因此引进任何一显带法之前,还要进行预试验。
实验材料

标本

试剂、试剂盒

磷酸缓冲液甲醇Giemsa胰蛋白酶

实验步骤

一、胰酶-Giemsa 混合显带法

1.  预处理

最中期染色体标本,置60 ℃~80 ℃温箱中20~30 分钟,或在37 ℃温箱过夜;然后浸入0.025 M磷酸缓冲液中,pH6.8,56 ℃温浴10 分钟(不经此步亦可);


2.  消化和染色

用现配的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10~30 分钟,混合液按如下比例配制

 

0.025 M 磷酸缓冲液pH6.8 73.0 ml
 

甲醇 27.0 ml
 

Giemsa干粉 50.0 mg


0.25%胰酶 0.3~0.4 ml


3.  封片

染色后用自来水冲洗(流水冲洗标本背面),入蒸馏水漂洗数次、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树脂中。

二、Giemsa 显带法


1.  预处理

将标本置入60~80 ℃温箱或烤箱中20~30 分钟;亦可在37 ℃温箱中
过夜;


2.  胰酶消化

用0.85 %的NaCl配制0.25 %胰蛋白酶溶液(微孔滤膜无菌滤过)
消化3~5 分钟(用滴加在标本上或用染色缸消化均可);


3.  染色

取出标本片,先直立于吸水纸上除去多余胰酶液后,随即置入Giemsa
染液中,染10 分钟;


4.  封片

自来水洗、蒸馏水漂洗、晾干、二甲苯透明2~3 分钟、封入中性树胶中。

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注意事项

1.  胰酶消化显带过程中,胰酶消化是重要的环节,消化不足带不出现,消化过度,染色体变得膨胀和不着色,必须把握好胰酶浓度和消化持续时间。

2.  预处理或老化是
显带过程中另一个重要环节,对消化和染色有很大影响,其中干热处理是较简便易行和效果好的办法。