植物体内蛋白质氮测定的原理和步骤

植物体内的氮化物可分为蛋白质氮和非蛋白质氮两大类。二者的含量和比例，随着植物的生理状况及环境条件的不同而发生变化。所以，测定两类氮化物含量的变化动态，对研究植物在不同情况下，氮素的吸收、运转和代谢规律，以及确定农产品的品质、营养价值等具有一定意义。

一、测定原理

在进行氮化物系统测定时，首先要将各类氮化物进行分离，分别消化，将非氨态氮转变为氨态氮。然后，用测氨态氮的方法进行测定。

1.分离：用三氯乙酸浸提样品时，蛋白质沉淀析出，而非蛋白质则熔解在三氯乙酸中，然后分别测定沉淀物及滤液中的氮量，即可求出蛋白氮和非蛋白氮的含量。’

2.消化：当植物材料与浓硫酸一起加热时，硫酸分解成为二氧化硫、水和原子态氧，将有机物氧化分解生成二氧化碳和水。反应为：

蛋白质在硫酸作用毛分解成氨基酸。氨基酸继续分解生成氨，氨与硫酸结合形成硫酸铰。反应为：

为了加速消化进程，加入硫酸钾及还原性催化剂硫酸铜。硫酸钾可大大提高氧化能力及增高硫酸的沸点。

二、测定步骤

1.分离提取：①在分析夭秤上准确称取磨碎过筛的风干样品0.1~0.5克(视含氮量而定)，放入 100毫升带塞磨口三角瓶中，加20毫升吞万的三氯乙酸，置振荡机上振荡提取一小时。然后用漏斗过滤，滤液直接渔入克氏瓶中，用三氯乙酸将三角瓶中样品冲 洗数次，每次用量10毫升，把样品残渣全部移入漏斗中，滤液全部滤入克氏瓶内(冲洗液最不要过多)。②将瓶内的滤液浓缩至3、5毫升，用以测定非蛋白氮. 再将漏斗中沉淀连同滤纸一道放入另1个克氏瓶中，用以测定蛋白氮，并取同样重量的嫩纸一张，放在第三个克氏瓶中，作空白测定。

2.消化：①向以上样品及空白测定的克氏瓶中各加入浓硫酸3、6毫升，混合催化剂0.3、0.5克(如 用比色法测定氮，消化时不必加催化剂，而用幼万的过氧化氢促进载化)。加好后，盖上小漏斗，浸泡样品数小时或1夜。这样，可以减少泡沫，防止外溢。②开始 消化时火焰宜小，待有二氧化硫气体出现后，逐渐升温，使内容物达到曦沸。在消化过程中，瓶巾的颜色将发生以下的变化。黑、深棕一浅棕一黄一绿，蓝绿在消化 过程中，须经常转动克氏瓶。当溶液变成浅棕色时，如果瓶璧还附有黑色倾拉时，可以将瓶适当揭动使黑粒洗下。继续加热。至溶液呈清亮的蓝色后，再加热10分 钟俏化完毕。此时样品中的蛋白氮和非蛋白氮化物全部转变为氨态氮。③待瓶冷却后，向其中加10毫升蒸馏水，摇匀，并小心倒入10D毫升容量瓶中。再以少最 燕馏水稀释至刻度，混匀备用。

3.氮的测定：氮的测定可用KDN系列定氮仪法，也可以用次卤酸氧化法成其它比色法。