一、材料处理
1. 外植体选择
在生长健壮、无病虫害的盆栽橡皮树植株上切取当年生嫩枝作为外植体。
2. 材料的处理与灭菌
将外植体去掉叶片及叶柄,剪成带顶芽和腋芽的茎段,长约3 -5cm 左右。先用中性洗洁精溶液浸泡10 -20min ,自来水冲洗20 -30min 。在超净台上将预处理后的外植体用75 %酒精表面消毒,无菌水冲洗3 遍。再用2%次氯酸钠浸泡振荡灭菌10 -15min 或用0.1 %升汞溶液灭菌10 -15min ,无菌水冲洗3 -5 遍,滤去无菌水后滤纸吸干备用。
二、组培繁殖
1. 诱导培养
将灭过菌的顶芽和带腋芽茎段接种在MS + BA2mg / L + IAA0.2mg / L 诱导培养基上。诱导培养30 -45 天后,诱导顶芽和腋芽萌芽,然后分化出丛生芽。
2. 增殖培养
将丛生芽切成单株接入MS + BA0.5mg / L + IAA0.05mg / L 增殖培养基中进行增殖培养,增殖培养30 -45 天后,分化出丛生芽,增殖率可达3 倍以上,且长势好,叶片特性能保持原性状。
壮苗培养增殖丛生芽生长在细胞分裂素浓度较高的培养基中,芽生长较弱,且芽体内又积累了一定量的细胞分裂素,此时剪下作为生根苗质量差,不利于生根,所以增殖丛生芽用于生根时,需进行壮苗培养。
壮苗培养基一般是在增殖激素的量上降低一半或更多。将增殖的丛生芽转入l / 2MS + BA0.1mg / L + I AA0.01mg / L 壮苗培养基后,腋芽萌发减少,株高生长迅速,芽粗壮,节间距加长,叶片变大,20 -30 天后,幼苗茎高可达到3-5cm。
3. 生根培养
经壮苗培养的无根组培苗,当茎高为3 -5cm 时,从茎的基部切断,转到l / 2MS + NAA0.2mg / L 生根培养基进行生根培养。培养10 -15天后陆续有根产生,根系粗壮、整齐,组培苗长势好,叶片浓绿有光泽。
三、基本培养基和培养条件
1. 基本培养基
所用的基本培养基为MS 培养基或大量元素减半的1 / 2MS 培养基,添加蔗糖或白糖30g / L ,琼脂7g / L , pH 值为5.8 。
2. 培养条件
培养室温度25 ℃ 土2 ℃ 、光照10 -12 小时/天、光强20001x 。
四、驯化与移栽
1. 移栽时间
橡皮树在有加温设备的温室内可一年四季进行组培苗移栽,但在没有加温条件时,一般可在3 -11 月进行移栽,最佳时间为4 -6 月和9-11月,气温在12 ℃ -25 ℃ 之间,且空气相对湿度较大,移栽的植株成活率较高。
2. 驯化与移栽
生根培养20 -30 天后,组培苗长到4-5 片叶、3-4 条根且苗高为5 -7cm ,植株株体较健壮时,将培养瓶置于温室大棚的苗床上,利用自然光照进行过渡驯化,以增强幼苗对环境的适应能力。
驯化5-7 天后将幼苗取出,在清水中洗净附着在根上的培养基。移栽基质由泥炭:珍珠岩:蛙石按体积比2 : 1 : l 配制而成,移栽穴盘采用72 孔或50 孔,基质装满孔穴,用50 %多菌灵500 倍液浸湿消毒处理。每穴移栽1 株组培苗后压实基质。移栽完毕后将穴盘放置苗床上,浇足定根水。
3. 移栽后管理
移栽后第1 周要覆盖塑料薄膜,第2 周逐渐增加通风,以便使组培苗尽快适应外部环境。第2 周后每天叶面喷雾1-2 次。棚内温度保持在20 ℃ -25 ℃ ,相对湿度在90 %以上,用遮阳网遮去强光,橡皮树生长很快,每周长出1片新叶。
移栽第4 -8 周,逐渐增加光照,结合浇水,每10 天可用0.3 % 尿素溶液和磷酸二氢钾溶液进行叶面喷施。移栽2 个月后可定植,移栽成活率可达90 %以上。
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