氨基酸总量(氨态氮)的测定

　　一、目的与原理：

　　1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原理：

　　 二、单指示剂甲醛滴定法：

　　 (一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

　　（二）试剂

　　(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。

　　(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。

　　(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。

　　(三)操作步骤：

　　称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算

　　计算：

　　 氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W

　　式中：

　　N：NaOH标准溶液当量浓渡。

　　V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)

　　W：样品溶液相当样品重量(克)。

　　0.014：氮的毫克当量。

　　三、双指示剂甲醛滴定法：

　　(一)原理：

　　与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。

　　 (二)试剂：

　　 (1)三种试剂同单指示剂法

　　 (2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)

　　 (三)操作步骤：

　　 取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中， 一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式计算。

　　计算：

　　氨基酸态氮(％)=( N(V2-V1)×0.014)/W×100

　　式中：

　　V2：用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量(毫升)

　　V1：用中性红作指示剂时碱液的消耗量(m1)。

　　N：标准碱液当量浓度。

　　W：样品的重量(克)。．

　　0.014：氮的毫克当量。

　　注意事项：

　　测定时样品的颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定．