牛血清蛋白的测定方法以及用途

   牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别，它不是一定的，而是多聚物的，有的地方测试

牛血清白蛋白分子式数据为70 000，这一数据是在做PCR的时候使用的数据。

    牛血清白蛋白是血液中的主要成分（38g/100ml），分子量68kD，等电点4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛血清蛋白溶液可以作为测量蛋白质含量的标准曲线用。

  一般买回来的牛血清蛋白是细小片状的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以铁为基本原料。

用途

1、特纯级牛血清蛋白

用途：用作酶标、金标等诊断试剂的封闭剂，生化试验等。

电场対超感牛血清白蛋白截留率的影响

性状：淡黄色干燥粉末

2、无脂肪酸牛血清蛋白

用途：用作酶标、金标等诊断试剂的封闭剂、保护剂，尤其适用于容易受脂肪酸影响的产品和试验。

性状：淡黄色干燥粉末

3、无蛋白酶牛血清蛋白

用途：用于酶标、金标等诊断试剂的封闭剂、保护剂，尤其适合血液脂类的诊断试验、脂类诊断试剂及对纯度要求高的产品。

性状：淡黄色干燥粉末

4、细胞培养级牛血清蛋白

用途：无血清培养基的蛋白添加剂，供细胞培养使用。

性状：淡黄色干燥粉末白蛋白

测定

标准曲线

一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术  。

测定方法

1. 凯氏定氮法

2. 双缩脲法

3. Folin-酚试剂法

4. 紫外吸收法

5. 考马斯亮蓝法

试剂

1. 考马斯亮蓝试剂：

考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。zui终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。

2. 标准蛋白质溶液：

纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

器材

1. 722S型分光光度计使用及原理。

2. 移液管使用。

制作步骤

试管编号 0 1 2 3 4 5 6

100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5

摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色

3、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。

（1）、利用标准曲线查出回归方程。

（2）、用公式计算回归方程。

（3）、或用origin作图 ，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6

一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。

(4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。

含量的测定

样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。

一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。

注意事项

1. 玻璃仪器要洗涤干净。

2. 取量要准确。

3. 玻璃仪器要干燥，避免温度变化。

4. 对照：用被测物质以外的物质作空白对照