石蜡切片的制作

以石蜡制作的切片，可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外，石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普通常用的一种方法。

一、切片前的准备： 

1、恒温水浴 锅首先预热至35℃—40℃。

2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。

3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。

蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。

4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。

5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。

二、切片的步骤：

1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。

3、根据需要调整切片厚度。

4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。

5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。

6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。

三、切片的注意事项 

1、切片质量的好坏，除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外，切片刀是决定的因素，所以刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起，或将组织划伤出现刀痕，更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在，将使制成的切片断裂、破碎，不完整，切片时应时时擦净刀口。

2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。在每次更换蜡块时，应习惯地检查一下组织块是否夹紧，切片刀是否稳固，稍有疏忽就会影响切片质量，甚至将蜡块全部切坏，造成不可弥补的后果。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障，最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。

3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则可因用力过重而使机身震动，造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时，更应该轻轻切削，以防组织由于震动形成空洞现象。

4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，这样不仅可保持石蜡的硬度，同时也减少了切片的褶皱，给切片制作带来方便。

四、贴片 ：

1、将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。

2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起，趁玻片上仍有少量水份时用毛笔，拨正切片位置。如组织较小，可在玻片上多贴几片或几排，但排列应密集、整齐。

3、用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。

4、将附贴好的切片置于60℃恒温箱 内干燥2小时，蛋白质凝固后即可进行染色。