实验方法原理 G+菌细胞壁肽聚糖含量多,结构致密,脂质少,乙醇不易渗入脱色;G-菌细胞壁肽聚糖含量少,结构疏松,脂质多,乙醇容易溶解脂质而渗入脱色。G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐,能与结晶紫、碘牢固结合,使乙醇不易将其脱色;G-菌菌体核糖核酸镁盐含量少,容易被乙醇脱色。G+菌等电点比G-菌低,在同样PH值条件下比G-菌所带负电荷多,容易与带正电荷的碱性染料(结晶紫),故不易被乙醇脱色。
实验步骤
1. 制备标本片
(1)取干净载玻片1块,用记号笔划分为2个区域,并作好标记;
(2)两区各加生理盐水1小滴
(3)用灭菌接种环分别挑取少量细菌,在个生理盐水中混匀铺开,形成一薄层菌膜。
(4)在室温下自然干燥。
(5)将标本通过火焰2~3次固定标本,自然冷却。
2. 革兰氏染色
(1)初染:在菌膜上滴加结晶紫,以盖满菌膜为度,约1分钟后,用细水流将染液冲洗。
(2)酶染:滴加卢戈氏碘液数滴,约1分钟后轻轻冲洗。
(3)脱色:滴加95%酒精3~4滴,轻轻晃动玻片数秒钟,倾斜玻片弃去酒精,如此反复数次后,流下的酒精几乎无色或稍呈淡紫色,最后冲洗。
(4)复染:滴加稀释复红染液数滴,约1分钟后冲洗。
染色完毕后,用吸水纸将玻片吸干,滴加香柏油,镜检。
3. 结果判定:白色葡萄球菌被染成紫色,为革兰氏阳性(G+)菌,大肠杆菌被染成红色,为革兰氏阴性(G-)菌。
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