网织红细胞样品的制备及分析

全血

EDTA Good 缓冲液 枸橼酸钠缓冲液 戊二醛缓冲液 PBS 派若宁 Y 工作液

1. 抽取全血 0.5 ml，注入盛有 0.5 ml 的 0.1 mol/L EDTA 溶液中。

2. 用微量取液器取 50 uI EDTA 抗凝血，置于另一离心管中，加入 Good 缓冲液 5.0 ml，以 1000 r/min 离心 5 min，连续洗 3 次。

3. 将沉淀细胞加入 1.0 ml 枸橼酸钠缓冲液，轻轻振荡悬浮。

4. 将悬浮液缓慢注入盛有 4 ml 0.1% 戊二醛缓冲液中固定 15 min。

5. 上 FCM 之前，用 PBS 洗去固定液，加入 0.5 ml 0.01% 的派若宁 Y 工作液，染色 30 min 离心沉淀物，去染液，然后 1500 r/min 离心 5 min。

6. 用 PBS 洗 1 次，以 1500 r/min 离心 5 min，去上清液，再用 PBS 将细胞悬浮，上机检测。