网织红细胞样品的制备及分析

实验方法原理 网织红细胞是一种未完全成熟红细胞。在细胞成熟过程中，其胞质中的 RNA 含量逐渐被血红蛋白所取代，因此，检测红细胞中 RNA 的含量多少，就代表了红细胞的成熟程度。从而成为检测网织红细胞的重要方法。网织红细胞计数可以判断骨髓红细胞系统造血情况。溶血性贫血时由于大量网织红细胞进入血循环，可使网织红细胞高达 0.20 或更高。急性失血后 5~10 d，网织红细胞达高峰。2 周后恢复正常。典型再生障碍性贫血病例，网织红细胞百分比常为 0.005。网织红细胞数低于 5 X 109/L 且为诊断再生障碍性贫血的标准之一。网织红细胞升高表示骨髓红细胞增生活跃，多见于各种急慢性失血溶血和治疗有效的各类增生性贫血，如缺铁性贫血、溶血性贫血、巨幼细胞性贫血等，是贫血治疗中非常高价值的监测指标。网织红细胞减低见于各种骨髓增生能力低下的疾病，尤多见于重型再生障碍性贫血等。

实验材料 全血

试剂、试剂盒 EDTAGood 缓冲液枸橼酸钠缓冲液戊二醛缓冲液PBS派若宁 Y 工作液

实验步骤

1. 抽取全血 0.5 ml，注入盛有 0.5 ml 的 0.1 mol/L EDTA 溶液中。

2. 用微量取液器取 50 μI EDTA 抗凝血，置于另一离心管中，加入 Good 缓冲液 5.0 ml，以 1000 r/min 离心 5 min，连续洗 3 次。

3. 将沉淀细胞加入 1.0 ml 枸橼酸钠缓冲液，轻轻振荡悬浮。

4. 将悬浮液缓慢注入盛有 4 ml 0.1% 戊二醛缓冲液中固定 15 min。

5. 上 FCM 之前，用 PBS 洗去固定液，加入 0.5 ml 0.01% 的派若宁 Y 工作液，染色 30 min 离心沉淀物，去染液，然后 1500 r/min 离心 5 min。

6. 用 PBS 洗 1 次，以 1500 r/min 离心 5 min，去上清液，再用 PBS 将细胞悬浮，上机检测。