肿瘤标志物检测的影响因素和应用原则(2)

二、肿瘤标志物检测的影响因素和质量控制

㈠ 分析前

1. 标本的采集 血液标本的正确采集和保存是肿瘤标志物测定结果准确的重要保证。如前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、导尿和直肠镜检查后，血液 PSA 和 PAP 值可升高；肝、肾功能异常和胆道排泄不畅、胆汁淤滞等均可造成肿瘤标志物如 CEA 、 ALP 、 GGT 、 细胞因子 等浓度增高；某些药物会影响肿瘤标志物的浓度，如抗雄激素治疗前列腺癌时可抑制 PSA 产生，导致PSA 假阴性结果；唾液和汗液污染标本可使SCC 升高。

　　由于红细胞和血小板中也存在神经元特异性烯醇化酶（ NSE ），因此，样本溶血可使血液中NSE 浓度增高。 试管内的促凝剂，对某些项目的测定有干扰。

2. 标本的保存 血液标本采集后应及时离心，保存于4 ℃ 冰箱中， 24 小时内测定；如在短期内测定，则应 -20 ℃ 保存，长期保存应置 -70 ℃ 冰箱 , 标本应防止反复冻融。酶类和激素类肿瘤标志物不稳定，易降解，应及时测定或低温保存。

㈡ 分析中

1. 测定方法和试剂对检测结果的影响： 从方法学来看，肿瘤标志物测定方法很多，有放射免疫测定法，酶联免疫测定法，化学发光免疫测定法等，每种测定方法有自己的精密度和重复性，但手工操作的方法重复性较差，误差比较大，操作时要特别认真；用自动化仪器进行测定，重复性好，误差小。

　　不同的试剂盒测定也有差异 , 其原因可能是由于使用的单克隆抗体针对抗原的位点不同所致。有时即使使用同一抗体，也可能因抗原异质性（如原发肿瘤转移后，失去了原有的抗原性而停止分泌原有的肿瘤抗原）或基质的影响而得到不同的结果。有研究报道，使用 12 种不同的 CEA 试剂盒检测某一混合血清中 CEA 的浓度，结果其差异超过 100% 。导致分析间误差的主要原因是没有测定的标准化，包括缺乏统一的抗原、抗原成分、校正品和参考方法等。因此，在工作中要尽量使用同一种方法，同一种仪器和同一厂家的试剂盒进行测定。

2. “钩状效应”对检测结果的影响： 肿瘤标志物的范围常涵盖几个数量级，“钩状效应”可将高浓度结果错误报告为低浓度。 酶联免疫测定或免疫放射测定时，若待测样本中抗原浓度过高，会出现高浓度后带现象，即“钩状效应”（ hook effect ），此时免疫反应被明显抑制，出现错误的低值，要消除这种干扰，只有对样本进行适当稀释后重新测定。

3. 交叉污染对检测结果的影响：当测定很高浓度的标本时，交叉污染成为一个导致假阳性的潜在问题，所以应不时地复查有无标本被交叉污染。

4. 嗜异性抗体对检测结果的影响： 大多数肿瘤标志物的测定中常使用 一对鼠 单克隆抗体来与肿瘤抗原反应，如果病人血清中存在嗜异性抗体（特别是人抗鼠抗体） ，它可能在两种鼠单克隆抗体间起“桥梁”作用，导致在无抗原的情况下，出现肿瘤标志物浓度增高的假象。避免的办法是在样本中先加入提纯的鼠 IgG ，经温育后，再用PEG 沉淀鼠IgG 和人抗鼠 IgG 复合物，然后再进行测定。嗜异性抗体可出现在曾被鼠或宠物咬过的人，以及使用过动物免疫剂（如单克隆抗体）治疗过的人。

5 肿瘤标志物检测的质量控制

⑴ 检测结果的重复性要求： 常规肿瘤标志物测定的变异系数， 批内 CV<5% ， 批间 CV<10% ( 期望值 ) 。

⑵ 室内质控标本的要求： 室内质控应包括阴性和阳性低值和高值质控血清，要能涵盖肿瘤标志物测定的范围 。

⑶ 室内质控品要求： 以血清为基质。

⑷ 室内质控图： 肿瘤标志物很少有参考方法 ，要坚持作室内质控图，以均值为靶值，来判断试验的稳定性和重复性。

㈢ 分析后：

1 ．参考值范围，不同标本如血液、尿液、胸、腹水等，必须有不同的参考值。不同地区、不同人群、不同方法、不同试剂和设备应建立自己的参考值范围。

2 ．病人基础测定值的变化，对于结果的分析极有价值。故应监测病人治疗前、治疗中和治疗后各个阶段 肿瘤标志物含量的变化，最好画一张肿瘤标志物含量 的变化的曲线图，以便综合分析。

3 ．上升或下降25 ％的临床意义 ，一般病人的结果在排除检测方法引起的误差后，上升或下降 25 ％都有临床价值。对于测定结果升高的标本必须复查，以防测定误差。

4 ．加强与临床的交流和沟通，由于肿瘤标志物测定其临床意义的特殊性，必须 加强与临床的交流和沟通，当改变肿瘤标志物检测方法和试剂时，必须通知临床，否则会影响结果的判断。 建议医师开化验单时提供简短的病人信息，如“手术后 ”“化疗 3 次后 ” 等，这对解释结果非常重要，还可帮助我们发现实验室的偶然差错。

5 ．必须知道肿瘤标志物的半寿期 ，这有助解释某些肿瘤标志物，如AFP 和hCG 的浓度变化， 对于临床判断疗效有重要意义。