脂肪酸的β氧化

原理
根据β-氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酸乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。
本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。
操作方法
击毙动物（家兔、大鼠或豚鼠），迅速放血，取出肝脏，在玻璃皿上剪成碎糜。
取50毫升锥形瓶 2个，各加入 3毫升 Locke氏溶液和 2毫升 PH7．6的磷酸缓冲浪。在一个锥形瓶中，加入3毫升0.2N丁酸溶液，另一个锥形瓶作为对照。取约0.5克肝组织两份（相等重量），分别置于两个锥形瓶内。混匀，于37℃恒温水浴内保温。
保温2小时后，取出锥形瓶，各加入2毫升15%三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加3毫升0.2N 丁酸溶液。混匀，静置 15分钟后过滤。分别吸取 5毫升滤波，放入另外两个锥形瓶中，再各加5毫升0．IN碘溶液和5毫升10%氢氧化钠溶液。摇匀后，静置10分钟。加入5毫升10%盐酸溶液中和。然后，用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，加入3滴淀粉溶液作指示剂。摇匀，并继续滴到蓝色消失。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠的毫升教，并按下式计算样品中丙酮含量：

式和B为滴定对照实验所消耗的0.1N硫代硫酸钠溶液毫升教；A为滴定样品所消耗的0.1N硫代硫酸钠溶液毫升数：0.9667为1毫升0.1N硫代硫酸钠溶液所相当的丙酮毫克数。
试剂和器材
一、试剂
（1）动物：家兔、大白鼠等。肝糜必须新鲜，放置久则失去氧化脂肪酸能力。
（2）Locke氏溶液：取 0.9克氯化钠、0.042克氯化钾、0.024克氯化钙、 0.015克碳酸氢钠及0.1克葡萄糖，溶于水中，稀释到100毫升。
（3）0.1N碘溶液：称取12.7克碘和约25克碘化钾，溶于水中，稀释到1000毫升，混匀，用标准硫代硫酸钠溶液标定。
（4）PH7.6，1/15的磷酸缓冲液。
（5）0.2N丁酸溶液：取18毫升正丁酸，用1N氢氧化钠溶液中和PH=7.6，并稀释至1000毫升。
（6）15%三氯乙酸溶液。 （7）10%氢氧化钠溶液。
（8）10%盐酸溶液 〔9〕0.1N硫代硫酸钠溶液
二、器材
（1）玻璃皿 （2）锥形瓶（50毫升）
（3）试管及试管架 （4）吸量管（2、5毫升）
（5）漏斗 （6）微量滴定管（5毫升）
（7）剪刀及镊子 （8）小台称。
（9）恒温水浴