葛根素的临床前安全性研究及免疫增强作用研究

葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提纯分离得到的有效成分，临床前研究表明葛根素无蓄积毒性，对心、肝、脾、肺、肾等无明显毒性，且具有抗心律失常、扩张血管、降血脂和增强免疫力等多种药理作用。为了使上市新药在临床治疗剂量下无毒，提高临床使用的安全性需要进行药物的临床前安全性评价。　

临床前研究是指药物进入临床研究之前所进行的化学合成或天然产物提纯研究、药物分析研究、药效学、药动学和毒理学研究以及药剂学的研究。美迪西生物医药是一家从事临床前研究外包服务（CRO）的公司，专门为客户提供可定制的临床前试验服务方案，拥有十余年研发技术经验积累，在药物代谢、药代动力学、药效研究，以及毒理学方面有专业的知识。

1、葛根素的临床前研究的毒性试验

（1）急性毒性研究

医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的，并以半数致死量（median lethal dose， LD50）来衡量药物急性毒性的大小。所谓LD50是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量，由于LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点，而且有易测、准确和重复性好的优点，以此作为药物使用的安全指标。在试验过程中，通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在24、48和72h的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标，判定某种生物材料的急性毒性作用。

小鼠静脉、腹腔注射葛根素的LD50分别为634.5mg/kg、1412.2mg/kg。小鼠灌胃及静注葛根素（溶于生理盐水）2g/kg，3次/d；狗静注（溶于生理盐水）50mg/kg*3d，均未见毒性反应。

（2）长期毒性研究

药物以一定的等级剂量连续多日给予受试动物的有害作用，为观察这种有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。急性毒性试验为一次性给药或24h内多次给药。长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药，给药期限可以从数天至终生甚至数代，一般为临床用药的3-4倍。

动物长期毒性实验表明，葛根素无蓄积毒性，对心肝脾肺肾等无明显毒性。致突变试验显示，葛根素无任何致突变活性。致畸试验表明，葛根素对雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖细胞均无制畸作用。大鼠肌注10、50mg/(kg.d)共3个月，狗静注10、30mg/(kg.d)共4周，体重、血象、心电图、肝肾功能及重要器官组织学检查，未见异常。唯狗30mg/kg大剂量组于给药后表现兴奋，5分钟后恢复正常。

2、葛根素注射液临床前研究之安全性试验

（1）血管刺激性试验

给家兔耳静脉缓慢滴注葛根素注射液，剂量为10ml/kg，每日一次，连续三日。结果发现家兔耳静脉给药部位肉眼观察无明显变化；病理切片显微镜检显示距注射部位1cm处血管和5cm处血管内皮连续、完整， 未增生、肿胀；血管周围组织未见炎性细胞浸润及坏死；管腔内无血栓形成。葛根素注射液对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用。

（2）过敏性试验

给豚鼠腹腔注射葛根素注射液0.5ml，隔日1次，共3次，给药后第14天及第21天分别股静脉注射该药1ml/只，结果均未见豚鼠有过敏反应。给予1%新鲜蛋清的豚鼠在给予蛋清后第14 天及第21天分别股静脉注射蛋清后均出现过敏反应，且皆于15分钟内死亡。

（3）溶血试验

葛根素注射液50mg/ml浓度，在体外试验条件下，在加样0.25 ～ 3.0小时内对家兔红细胞无溶血作用和红细胞凝集反应。

3、葛根素的免疫增强作用的临床前研究

多个学者的研究结果证实，葛根素具有降低心肌和脑缺血状态下如TNF-α或IL-6、ET-1等细胞因子的释放。其机制可能与抑制中性粒细胞内NF-κB活化有关。观察葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响，初步研究其作用机制。

方法是通过小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值等，检测葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响。结果发现免疫抑制模型小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值都显著下降。葛根素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值都显著升高。因此葛根素提高小鼠的细胞免疫功能，其机制可能和促进脾脏T淋巴细胞增值，纠正T淋巴细胞亚群Th1/Th2比例紊乱有关。

此外葛根素还具有抗癌及抗肿瘤作用。细胞色素P450是药物代谢系统中一组重要的酶，主要参与药物的代谢。葛根素在一定浓度内能明显抑制黑色素细胞的增殖。研究者采用免疫细胞化学方法，观察葛根素对癌细胞增殖凋亡的影响，发现随着剂量的增加，药物对癌细胞的抑制也增强，可显著抑制癌蛋白的表达，这可能与抑制氧化损伤有关。