薄层扫描法测定薄层扫描法中延胡索乙素的含量

胃得康片是佛山冯了性药业有限公司生产的中药成方制剂，由延胡索、佛手、鸡骨香、白及、枯矾、石菖蒲6味药组成，具有行气止痛的功效，用于气滞胃痛、胃及十二指肠溃疡疗效较好。为更好地控制该产品的质量，作者采用薄层扫描法对其处方中的君药延胡索中所含主要成分延胡索乙素进行含量测定。实验结果表明，该方法操作简便，结果可靠，能有效控制产品的内在质量。

    1 仪器与试药
    岛津CS-930双波长薄层扫描仪。延胡索乙素由中国药品生物制品检定所提供，批号726-9004。胃得康片由佛山冯了性药业有限公司生产。试剂均为分析纯。

    2 方法与结果
    2．1 对照品溶液的配制 取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
    2．2 供试品溶液的配制 取本品30片，研细，取约5g，精密称定，置锥形瓶中，加乙醚40mL、浓氨溶液2mL，混匀，放置24h后超声处理15min，滤过；药渣用乙醚洗涤3次，每次10mL，合并滤液及洗液，用10％醋酸溶液振摇提取4次(15，10，10，10 mL)，酸液用浓氨溶液调节pH值至10～11，再用氯仿振摇提取3次，每次15mL，合并氯仿提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至1mL，作为供试品溶液。
    2．3 薄层色谱条件薄层板：用1％氢氧化钠加0.3％羧甲基纤维素钠溶液制备。展开剂正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)。显色剂稀碘化铋钾试液。
    2．4 薄层扫描条件单波长反射法锯齿色谱扫描，狭缝0.4mm×0.4mm，线性化参数Sx=3，灵敏度中等，测定波长510nm。
    2．5 标准曲线及线性范围 用定量毛细管精密吸取延胡索乙素对照品溶液2，3，4，5，6μL，分别点于同一块薄层板上，按拟定的色谱和扫描条件，测定各斑点面积的积分值，以点样量为横坐标(X)，斑点峰吸收面积积分值为纵坐标(Y)，得一不通过原点的直线。回归方程为：Y=29770+17850X，r=0.9993线性范围为2.12～6.36μg。
    2．6 精密度实验同板精密度试验：在同一块薄层板上，重复点供试品溶液5μL 5个点，展开，显色，扫描，测定，结果RSD=2.7％(n=5)。异板精密度试验：取同一批号供试品溶液5μL，点样于5块薄层板上，展开，显色，测定，结果RSD=2.9％(n=5)。
    2.7 稳定性实验 取供试品溶液和对照品溶液，点样、展开、显色，每30min至1h测定1次样品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算含量，连续测定6h。结果表明6h之内，样品含量基本不变(RSD=2.4％，n=8)。
    2.8 重复性实验 精密称取同一批号的样品约5g，共5份，按上述方法提取并制备成供试品溶液，取上述供试品溶液5μL、对照品溶液2，4μL，分别在5块薄层板上点样，展开，显色，分别测定样品含量，结果RSD=2.9％(n=5)。
    2．9 加样回收试验 取已测得含量的样品，精密称取约5g，各5份，分别加入延胡索乙素对照品溶液(浓度为1.065 g/L)各0.5mL，精密量取，挥干溶剂，按供试品溶液制备方法提取，将供试品溶液5μL 、延胡索乙素对照品溶液2，6μL，交叉点于同一用1％氢氧化钠与0.3％羧甲基纤维素钠制备的硅胶G薄层板上，按拟定的色谱和扫描条件，分别测定各斑点面积积分值，计算出延胡索乙素的含量，减去已知样品中延胡索乙素的量，计算加样回收率，平均回收率为101.5％，RSD=1.9％(n=5)。
    2．10 样品含量测定 取3批样品按供试品溶液制备方法操作。精密吸取样品溶液5μL、对照品溶液2，4μL，分别交叉点于同一薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，显色，扫描，测得3批样品中延胡索乙素的含量。

  3 讨论
    3.1 提取方法的选择参考文献n刮，根据胃得康片的处方工艺和片剂的特点，拟定了提取胃得康片延胡索中延胡索乙素的不同提取方法。
    根据实验结果显示，用乙醚、氨水浸泡24h后，超声提取，用10％醋酸提取，提取液碱化后用氯仿萃取，蒸干，用甲醇定容的方法。此批样品所用的延胡索药材含延胡索乙素为0.51mg/g，每片含延胡索药材为0.072g，故所选用的方法提取较完全。
    3．2 由于用稀碘化铋钾作显色剂，显色剂中含有大量的水分，薄层板显色后，样品斑点非常不稳定，而且延胡索乙素浓度稍高，显色斑点在显色几分种后就会出现斑点中心变白，而且白斑不再显色，故采用斑点显色后在烘箱(100℃)烘3min，待水分消失后，显色稳定。