蛋白Marker使用常见问题分析

做蛋白表达实验时，通常用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况，MARK是其中非常重要的参照物，使用Mark会遇到以下几种情况：

条带模糊：

电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。

电泳缓冲液陈旧，建议使用新鲜的电泳缓冲液，为了获得理想的结果建议在使用前将缓冲液预冷。

分离胶的浓度偏低，建议使用合适的胶浓度。

SDS-PAGE凝胶放置时间过长，建议使用新配制的凝胶电泳。

带型不整齐：

建议点样时将蛋白marker 放在泳道中间。如在凝胶两侧泳道，由于边缘效应，离子强度不匀等，均会导致带型变宽或弯曲。

凝胶配制不匀，凝胶内存有气泡，或点样孔中有细碎的残胶。

样品滞留点样孔：

浓缩胶配制有问题或胶孔堵塞。

Marker蛋白表达检测

免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

技术原理

免疫荧光技术是根据抗原-抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在抗体的性质和定位。