融合蛋白的方法改进

  自从20世纪70年代中期融合标签技术出现以来，亲和标签已成为一种重组蛋白纯化十分有效的工具，具有结合特异性高、纯化条件温和、纯化步骤简便、适用性广泛等显著优势。通常，亲和标签定义为对特定的生物或化学配基具有高度亲和力的一段氨基酸序列，可以分成很多类，其中一个常用的小分子短肽标签是FLAG标签。
 
    通常，FLAG标签系统使用合成的FLAG短肽在非变性条件下进行融合蛋白的洗脱，从而保证了融合蛋白的生物活性。然而，FLAG短肽合成成本较高，不适用于大规模纯化，且需要额外步骤除去结合在层析介质上的短肽。
 
方法改进：

为此，我们进行了以下改进：

（1）改用精氨酸在偏酸条件下进行FLAG融合蛋白的洗脱，不仅纯化*，而且大大降低了纯化成本，简化了纯化步骤。

（2）结合一个接头结构的3*FLAG标签，这种标签天然亲水，因而不会改变融合蛋白的功能，遮盖融合蛋白的其他表位，或者降低融合蛋白的可溶性，尤其合适于某些需要维持生物活性的小分子目标蛋白。