转基因植物的分子检测与鉴定方法（四）

4.2 试纸条技术

与ELISA原理相似，不同之处是以硝化纤维膜代替聚苯乙烯反应板为固相载体。先将特异性抗体吸附在膜上，将膜放入混有样品的溶液中，蛋白质随着液相扩散，遇到抗体，发生抗原-抗体反应，通过阴性对照筛选阳性结果，并给出转基因成份含量的大致范围。试纸条方法是一种快速简便的定性检测方法，将试纸条放在待测样品抽提物中，5-10 min就可得出检测结果，检测过程不需要特殊仪器和熟练技能，经济便捷，特别适用于田间和现场检测。但试纸条检测只能对特定的单一靶蛋白进行检测。

另外，近来有文献报道了试纸条检测技术的新发展，可利用试纸条技术对样品中某一核酸序列进行特异性的检测，并且实现了在同一试纸条上对多个核酸序列的同时检测。这无疑拓展了这项技术的应用范围，有助于检测效率的提高。

4.3 原位杂交技术

原位杂交是通过杂交确定被检物在样本中的原本位置，是目前外源基因在染色体上定位及外源基因在组织细胞内表达定位的主要方法。染色体DNA原位杂交可用来确定外源基因在染色体上的整合位置，对研究外源基因遗传特性有重要意义。许多实验表明位置效应是影响外源基因稳定及表达的重要因素。 mRNA原位杂交可直观地观察到外源mRNA的表达量及不同发育时期表达有否差异。外源基因表达蛋白的组织细胞免疫定位可用来确定表达蛋白在转基因植物组织及细胞中的分布，成为研究转基因植物中外源基因功能及外源蛋白稳定性的重要手段。A.P.Santos等报道了利用原位杂交技术使不同组织和物种在分裂间期的外源基因(包括单拷贝基因)和它的转录本可视化，与在细胞分裂中期研究基因行为相比，因基因(外源基因)的表达主要是发生在染色体分裂间期的，因此更直观、更有意义，有助于准确预测外源基因是否表达，可望减少外源基因后期检测时间。

4.4  其它方法

近几年还发展了一些新的外源基因的检测方法，如质谱分析、色谱分析、生物传感器、近红外光谱、微纤维装置(Microfabricated Device)等，在转基因植物检测中都有应用。

综上所述，转基因植物的检测方法有很多。PCR可以检测目的基因是否整合在受体细胞的染色体上，但PCR检测灵敏，易受DNA污染，同时对多位点插入难以检测。检测外源基因整合在植物染色体上最可靠的方法就是Southern杂交和原位杂交。Southern杂交可检测外源基因插入的拷贝数和插入方式，是一种较为精确的分析，也是目前鉴定外源基因存在于转基因植物中的权威方法；原位杂交是可以检测外源基因存在的位置、整合外源基因的染色体及外源基因在该染色体上的位置。在外源基因的转录水平上，可用 Northern杂交和RT-PCR检测。Northern杂交是研究转基因植物中外源基因表达的重要方法，然而较烦琐，而RT-PCR较之操作简单，且更灵敏，特别是单拷贝时更常用。外源基因若编码蛋白，在转基因植物中表达蛋白的检测可采用ELISA和Western杂交。用 Western杂交检测外源基因是否表达，用ELISA则可做定量检测，两者常结合起来应用。

从转基因植物的检测技术来看，新技术不断涌现，多种技术相互结合，互相补充，朝着高效、便捷、安全、自动化方向发展。