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转基因植物的分子检测与鉴定方法(四)

4.2 试纸条技术与ELISA原理相似,不同之处是以硝化纤维膜代替聚苯乙烯反应板为固相载体。先将特异性抗体吸附在膜上,将膜放入混有样品的溶液中,蛋白质随着液相扩散,遇到抗体,发生抗原-抗体反应,通过阴性对照筛选阳性结果,并给出转基因成份含量的大致范围。试纸条方法是一种快速简便的定性检测方法,将试纸条放在待测样品抽提物中,5-10 min就可得出检测结果,检测过程不需要特殊仪器和熟练技能,经济便捷,特别适用于田间和现场检测。但试纸条检测只能对特定的单一靶蛋白进行检测。另外,近来有文献报道了试纸条检测技术的新发展,可利用试纸条技术对样品中某一核酸序列进行特异性的检测,并且实现了在同一试纸条上对多个核酸序列的同时检测。这无疑拓展了这项技术的应用范围,有助于检测效率的提高。4.3 原位杂交技术原位杂交是通过杂交确定被检物在样本中的原本位置,是目前外源基因在染色体上定位及外源基因在组织细胞内表达定位的主要方法。染色体DNA原位杂交可用......阅读全文

基因插入位点和模式实验

实验材料dCTP试剂、试剂盒乙醇次氯酸钠β-葡萄糖醛酸酶基因活性测定液溴化乙锭仪器、耗材培养室MS 培养基实验步骤一、转基因插入位点的数目第一代( T0)转基因植株外源基因的插入位点数目,一般都是通过遗传方法进行鉴定。虽然遗传分析可以在任何世代进行,但是一般选择转基因植株自交,或与野生型测交后得到的

基因插入位点和模式实验

实验材料dCTP                                        

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

棉花转基因技术基因枪法花粉活体育种实例

中国农科院棉花研究所针对 20 多个棉花品种,成功建立了高效、稳定的规模化转化体系,以流水线的操作方式,建立了高效、工厂化的棉花转基因技术体系。本文援引中国农业科学院棉花研究所的发明专利内容,以制备转 GAPDH 基因棉花的具体方法为例,以应用实例演示棉花转基因技术的具体应用案例。土壤盐渍化是一个全

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基因片段...

实验材料核苷酸                                         &n

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合转基因片段实验

实验材料核苷酸试剂、试剂盒冰水8-羟基喹啉秋水仙素固定剂酶解缓冲液仪器、耗材载玻片玻璃盖玻片解剖针及镊子实验步骤原位杂交的基本操作方法(图 14 .2 ) 演化自 Southern 杂交:标底是玻片上的染色体和细胞核,探针是带标记的待测 DNA 序列 [ 本书中即是转基因和对照,图 14.3(a)

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

PCR技术的基本原理及应用

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术,1985年美国PE公司人类遗传研究室发明了该项技术,Saiki等首先应用于镰状红细胞贫血的产前诊断,但由于操作方法繁琐未能全面推广应用。直到1988年耐热DNA聚合酶(Taq酶)的发现和应用,使PCR技术

PCR原理与应用

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术,1985年美国PE公司人类遗传研究室发明了该项技术,Saiki等首先应用于镰状红细胞贫血的产前诊断,但由于操作方法繁琐未能全面推广应用。直到1988年耐热DNA聚合酶(Taq酶)的发现和应用,使PCR技术

国家重大科学研究计划2011年度重要支持方向确定

各省、自治区、直辖市、计划单列市科技厅(委、局),新疆生产建设兵团科技局,国务院各有关部门办公厅(室):  国家重大科学研究计划是《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020年)》(以下简称《规划纲要》)部署的、引领未来发展、对科学和技术发展有很强带动作用的基础研究发展计划。  

2019中国生命科学领域CNS盘点:曹雪涛 颜宁 施一公上榜

  截至2019年12月23日,中国学者在Cell,Nature及Science在线发表了107篇文章(2019年的Cell ,Nature 及Science 已经全部更新),iNature团队对于这些文章做了系统的总结:  按杂志来划分:Cell 发表了31篇,Nature 发表了44篇,Scie

有关TILLING技术介绍及相关的文献下载

TILLING 技术是于上个世纪 90年代末期,美国 Fred Hutchinson癌症研究中心基础科学研究所的 Steven Henikoff领导的研究小组发展起来的( 1)。目前, TILLING技术作为种研究方法已经应用于多种生物中,如拟南芥、玉米、水稻、百脉根、小鼠、斑马鱼、果蝇、线虫等。对

基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(三)

3.2 dPCR在转基因植物检测方面的研究 转基因植物及相关食品的定量分析主要测定转入基因的相对含量。目前常用qPCR作为核酸定量方法。dPCR可以不需要校准物而准确测量低拷贝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米种子的外源检测基因和hmg基因的拷贝数,

如何确定转基因拷贝数

鉴定转基因植物的第一步就是要确定被转基因已经稳定的整合到了染色体上。第二步任务就是评估有多少个转基因拷贝,以及每个转基因的表达水平如何。一般经过上游表达载体的设计构建以及下游转化体系的建立、转化品系的筛选鉴定等一系列步骤后,即获得 T 0 代转基因植物。在转化过程中,外源 DNA 随机插入植物

遗传修饰(转基因)风险评估(二)

3. 慎重向环境释放未经事先批准的转基因植物是不能够释放到环境中去的。在欧洲,2001/18 号欧盟指令( 见注 7 ) 专门规定了慎重向环境中释放转基因植物。该指令涵盖了两种类型的环境释放: 实验释放 ( B 部分)和投放市场的商业释放( C 部分)( 见注 8) 。对于每个授权的 B 释

基因技术专题-2

RNAi技术RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应

转基因食品的检测(二)

(1) 定性PCR法定性PCR可直接检测启动子、终止子、标记基因片断、目的基因片断。为使目的基因很好的进行表达,在构建基因表达载体时常在目的基因的5’和3’端分别加上启动子和终止子。当前大约75%的转基因植物中使用Ca MV( Cauliflower mosaicvirus) 3 5 S启动

2017年5月CRISPR/Cas亮点盘点

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。  

07年国家质检总局“科技兴检奖”拟奖目录公示公告

2007年度国家质量监督检验检疫总局“科技兴检奖”评审工作已经结束,共评审出拟奖项目202项,现予以公示。自公示之日起1个月内为公示期。任何单位和个人对本公告公示的项目有异议,均可在公示期内,以书面形式向国家质量监督检验检疫总局科技司科研管理处提出。    &

转基因生物新品种培育科技重大专项

  根据转基因重大专项总体实施方案和“十二五”实施计划,为更广泛地凝聚和整合国内优势力量,进一步推进各项研究任务的顺利完成,现安排一批重点课题,采取自由申请、专家评审、择优支持的方式遴选承担单位。   一、申报要求   (一)基本要求   1.申报内容必须在指南范围之内,超出指南范围

转基因重大专项2014重点课题申报指南公布

  根据转基因重大专项总体实施方案和“十二五”实施计划,为更广泛地凝聚和整合国内优势力量,进一步推进各项研究任务的顺利完成,现安排一批重点课题,采取自由申请、专家评审、择优支持的方式遴选承担单位。   一、申报要求   (一)基本要求   1.申报内容必须在指南范围之内,超出指南范围的不予受理

CFAS食品与农产品安全微生物检测专题报告集锦

  2015年6月17日,第四届中国食品与农产品质量安全检测技术国际论坛暨展览会(简称 CFAS 2015)在北京国家会议中心举办。在18日的食品与农产品安全微生物检测专题会场上,来自企事业单位、科研院所的近百人就食品微生物检测的热点问题进行了探讨。食品与农产品安全微生物检测专题现场江南大

2014年世界生物医学科技发展回顾

  生物 医学  美 国  遗传研究更深入掌控基因;细胞学攻克检测与治疗多项难题;脑科学研究记忆刺激技术帮助恢复记忆,发现大脑存在“意识开关”和“信息交换台”。  田学科(本报驻美国记者)遗传学方面,杜克大学绘制出综合酵母菌基因脆弱位点图,而脆弱位点所在区域正是DNA复制机变慢或停顿的地方

全面回顾:2014年全球生物医学突破进展

  美 国  遗传研究更深入掌控基因;细胞学攻克检测与治疗多项难题;脑科学研究记忆刺激技术帮助恢复记忆,发现大脑存在“意识开关”和“信息交换台”。  遗传学方面,杜克大学绘制出综合酵母菌基因脆弱位点图,而脆弱位点所在区域正是DNA复制机变慢或停顿的地方,揭示了许多固体肿瘤中基因异常的源头;冷泉港实验

转基因植物的分子检测与鉴定方法(三)

3  转基因植株外源基因表达情况的检测与鉴定尽管在mRNA水平也能一定程度地研究外源基因的表达,但存在mRNA在细胞质中被特异性地降解等情况,mRNA与表达蛋白质的相关性不高(相关系数低于0.5),基因表达的中间产物mRNA水平的研究并不能取代基因最终表达产物的研究。转基因植株外源基因表达

2011国家质检总局“科技兴检奖”获奖项目公示

  2011年度国家质量监督检验检疫总局“科技兴检奖”评审工作已经结束,共评审出拟获奖项目248项,现予以公示。自公示之日起一个月内为公示期。任何单位和个人对本公告公示的项目有异议,均可在公示期内,以书面形式向国家质量监督检验检疫总局科技司提出。   2011年度国家质量监督检验检疫总局“科技兴检

食品业19人获得工程院院士增选有效候选人

  近日,中国工程院公布了经院主席团审定的521名2015年院士增选有效候选人名单,名单详细列举了有效候选人的姓名、年龄、专业、工作单位和提名渠道,提名渠道分别是院士提名和中国科协提名。   据了解,有效候选人大多数来自高校和科研院所,少部分来自企业和军队等。为使院士称号回归学术性、荣誉性的本质,中

转基因植物的分子检测与鉴定方法(一)

随着分子生物学和植物基因工程的不断发展,越来越多的育种工作者开始利用转基因技术获得常规育种技术难以得到的新种质和新品种。植物转基因技术最大的好处在于可以打破自然界物种间原有的生殖隔离,促进基因在不同物种间的交流,极大地丰富变异类型,增大遗传多样性,为植物新品种的培育提供丰富的育种资源。通过对基因功能

质谱沙龙第十五期活动报道

    2008年12月21日下午,质谱沙龙第十五期活动在第二炮兵总医院远程会诊中心会议室举行。来自发酵研究院、清华大学、二炮总医院、朝阳医院、北大医学院、北医三院、安贞医院、解放军307医院、中科院植物所、AB公司的各位专家、老师、学生20余人。  

第七届中国北京国际食品安全高峰论坛在京顺利召开

  2014年4月1~2日,第七届北京国际食品安全高峰论坛在北京国际会议中心隆重开幕。本次高峰论坛由北京食品学会和北京食品协会主办,北京食品学会会展部承办。来自各大科研机构、院校、厂商的科研工作者们近500人参加并聆听了论坛开幕式。北京食品学会理事长金宗濂教授和如新日用保健品有限公司大中华