酱油中山梨酸、苯甲酸的测定

一、目的与要求：

    1、掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。

    二、原理：

    样品酸化后，用乙醚提取山梨酸，苯甲酸。将样品提取液浓缩，点于浆酰胺薄层板上，展开,显色后，根据薄层板上山梨酸，苯甲酸的比移值与标准比较定性，并可进行概略定量。

    三、试剂与仪器：

1、异丙醇

2、正丁醇

3、石油醚沸程：30-60℃。

4、乙醚：不含过氧化物

5、氨水

6、6N盐酸：取100毫升盐酸

7、无水乙醇。

8、聚酰胺粉：200目。

    9、山梨酸标准溶液：精密称取0.2000克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于200毫克山梨酸。

    10、苯甲酸标准溶液：精密称取0.2000克苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2毫克苯甲酸。

    11、展开剂

    (1)正丁醇-氨K--无水乙醇(7：1：2)

    (2)异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)

    12、显色剂：O.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液，用0.1N氢氧化钠溶液

调至PH=8。

13、4％氯化钠酸性溶液：于4％的氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。

14、吹风机。

15、层析缸。

16、玻璃板：10 X 450px

17、微量注射器：10微升，100微升。

18、喷雾器。

四、操作方法

1、样品提取

    称取2.5克事先混合均匀的样品，置于25毫升带塞量筒中，加0.5毫升6N盐酸酸化，用15、10毫升乙醚提取两次，每次振摇1分钟，将上层醚提取液吸人另一个25毫升带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3毫升4％氯化钠酸性溶液洗涤两次，静止15分钟，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人25毫升容量瓶中。加乙醚至刻度混匀，吸取l0.0毫升乙醚提取液分两次置于10毫升带塞离心管中，在约40  (2的水浴上挥发干，加入0.10毫升乙醇溶解残渣，备用。

    2、测定

    (1)聚酰胺粉板的制备：称取1.6克聚酰胺粉，加0.4克可溶性淀粉加约重5毫升，研磨3-5分钟，立即倒入涂布器内制成10 X  200px、厚度0.3mm的薄层板两块，于室温干燥后保存，于80℃干燥1小时，取出，置于干燥器中保存。

    (2)点样：在薄层板下端50px的基线上，用微量注射器点1微升，2微升样品液，同时各点1微升、2微升山梨酸、苯甲酸标准溶液。

      (3)展开与显色：将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂[(1)或(2)]的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至lOcm，取出挥干，喷显色剂、斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含有山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82，0.73)。

                      A×1000

计算：    X=( A×1000)/(m×10/25×V2/V1×1000)

X：样品中山梨酸(苯甲酸)的含量，g／kg；

A：测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量，mg；

M：样品质量，g；

V_l：加入乙醇的体积，ml．，

V₂：测定时点样的体积，ml；    ·

10：测定时吸取乙醚提取液的体积，ml；

25：样品乙醚提取液总体积，m1。

注：此方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。