重组蛋白真核表达采用原核表达系统进行研究,主要方法是将已克隆到目的基因DNA的片段的载体转化到细菌中,通过IPTG诱导和终纯化获得所需的目的蛋白。其优点是可以在短时间内获得基因表达产物,所需成本相对较低。
目前的表达系统各有利弊,但一般理想的表达系统满足以下几点:一是特异性,不受其他内源性因素影响,只能通过外源性无毒物激活。二是不干扰,不干扰细胞通路。以及诱导剂的诱导性、生物利用度、可塑性和剂量依赖性。
因此,在选择表达系统时,必须充分考虑各种因素,如蛋白质性质、实验条件、生产成本、表达水平和安全性。权衡利弊后,选择相应的表达系统。
原核表达系统与重组蛋白真核表达系统的区别:
1.根本的区别是,原核表达系统的表达系统是原核细胞;真核表达系统在真核细胞如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达。
2.两种表达系统都通过含有原核或真核启动子和其他表达相关元件的质粒系统表达外源基因。
3.与真核表达系统相比,原核表达系统的表达效率易于优化和调整,表达量高。然而,当用于表达真核外源基因时,由于不同的蛋白质折叠和糖链修饰,其应用受到限制。真核表达系统的表达量相对较低。虽然酵母和昆虫系统的表达量相对较高,但哺乳动物基因的表达也存在不足。
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