铜绿假单胞菌耐药表型分析及MALDITOFMS在其同源性分析

目的：

初步分析我院某科铜绿假单胞菌耐药表型及评价采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（Matrix-Assisted　Laser　Desorption/　Ionization　Time　of　Flight　Mass　Spectrometry　，MALDI-TOF　MS）的VITEK　MS质谱仪(VITEK　　Mass　Spectrometry　)对铜绿假单胞菌（Pseudomonas　aeruginosa）同源性的分型能力，为快速确定医院内感染提供实验室依据。

方法：

对2015年4月至2016年6月西安交通大学第一附属医院某科的四个普通病区和重症监护病房（ICU)分离的35株铜绿假单胞菌进行回顾分析。应用VITEK　2　compact对35株铜绿假单胞菌做药敏分析，通过分析软件中AEC专家系统匹配出β-内酰胺酶最典型的耐药表型。　　用DiversiLab方法对铜绿假单胞菌进行分型，判断菌株是否具有同源性。以DiversiLab系统的分型结果为准，初步评价VITEK　MS质谱仪对铜绿假单胞菌同源性的分型能力。

结果：

1）35株铜绿假单胞菌药敏β-内酰胺酶类耐药表型分别是：野生型占2.9%（1/35）；高水平耐药占5.7%(2/35)；获得性青霉素酶占2.9%（1/35）；低水平非酶TICAR耐药占25.7%（9/35）；高水平R+R碳青霉烯类（不透性）占22.9%(8/35)；碳青霉烯类（METALLO-或OXA占11.4%（4/35）；碳青霉烯类耐药（不透性）占11.4%（4/35）；碳青霉烯类（METALLO-或OXA）和高水平R+R碳青霉烯类（不透性）混合型占17.1%（6/35）。药敏MIC耐药率：IPM和MEM耐药率为60%(21/35)。　　

2）DiversiLab系统分型结果：按Kullback-Leibler法(KL)以相似度95%为分型标准将35株铜绿假单胞菌分成11个散发菌株和6个不同亲缘关系的克隆组：第1组2株细菌；第2组3株细菌；第3组11株细菌第4组3株细菌；第5组2株细菌；第6组2株细菌。其中第3克隆组亲缘关系最近，相似度大于95%，是主要的流行株。　　

3）VITEK　MS质谱仪分型结果：将35株铜绿假单胞菌进行聚类分析获得两种类型树状图：（1）第一种类型树状图：将35株铜绿假单胞菌以菌株分类值（taxonomy）80%为标准将35株菌株分为2个不同亲缘关系克隆组及9个散发菌株，第一克隆组按相似度85%又可再细分为三个亚克隆组和10个散发菌株。（2）第二种树状图：以菌株分类值（taxonomy）70%　为标准将菌株峰质荷比（Identical　masses）分为1个有不同亲缘关系的克隆组和9个散发株。　　

4）DiversiLab与VITEK　MS两种方法比对结果：将DiversiLab系统中5组亚克隆组菌株的树状图及指纹图谱分别与VITEK　MS质谱仪峰型图比较发现：①每组细菌树状图和指纹图谱比较，菌株分型结果吻合；DiversiLab系统相似度均大于95%，VITEK　MS质谱分类值大于70%。②DiversiLab系统中每组中菌株间亲缘性水平越高，对应菌株之间质谱图中存在相同峰的数量越多，并且含有相同峰质荷比值的数量也越多。

结论：

1)35株铜绿假单胞菌以β-内酰胺酶类抗生素耐药率最高，其中碳青霉烯类耐药率60%，头孢类耐药率约60%；氟喹诺酮类耐药率最低。铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药可能与外膜通透性改变有关。

2)35株铜绿假单胞菌中有同源性菌株，说明有流行菌株存在。同一病区内和不同病区间均存在同源性菌株，不同部位来源的铜绿假单胞菌间有高度同源性。

3)相对于DiversiLab系统，VITEK　MS在细菌同源性分型方面只能起到初步分析的作用。