食品微生物检测实验室操作要求

    食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品;二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。

　　无菌操作要求

　　1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。

　　2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。

　　3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。

　　4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。

　　5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。

　　6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

　　7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。

　　8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

　　无菌间使用要求

　　1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5～0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

　　2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%～3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。

　　3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

　　4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

　　5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。

　　消毒灭菌要求

　　微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。

　　干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法

　　1.灭菌前准备

　　(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。

　　(2)装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。

　　2.装放

　　(1)干热灭菌器：装放物品不可过挤且不能接触箱的四壁。

　　(2)大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。

　　3.设备检查

　　(1)检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。

　　(2)检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。

　　(3)对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。

　　4.灭菌处理

　　(1)干热灭菌法：

　　此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。

　　①器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。

　　②灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。

　　③菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度升至160℃调节指示灯，维持1.5～2h。

　　④灭菌完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。

　　(2)手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：

　　①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换);

　　②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用);

　　③盖好顶盖拧紧，勿使漏气;置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气10～15min);

　　④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定);

　　⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下，再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。

　　(3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：

　　①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出;

　　②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出;

　　③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定;

　　④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破;

　　⑤使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行;

　　5.灭菌温度与时间

　　(1) 干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5～2h。

　　(2) 压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间

　　间歇灭菌方法

　　1.灭菌方法系：

　　利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。

　　(1)将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。

　　(2)关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒10～20min。

　　(3)灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。

　　2.血清凝固器使用方法:

　　培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到灭菌目的：

　　(1)在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用;

　　(2)将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃一小时后灭菌，放37℃温箱过夜，再如此灭菌三次。

　　3.煮沸消毒：

　　可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可达到灭菌目的，但选用煮沸消毒的增消剂时，应注意对物品的腐蚀性。