高通量筛选技术揭示AAV衣壳蛋白是如何演化的？

　　在最近一项研究中，研究人员使用腺相关病毒（AAV）载体衣壳库的高通量筛选来最大程度地获得具有所需特性的AAV变异体的可能性。这些实验的结果使他们获得了一些意想不到的知识，相关结果发表在最近一期的《Human Gene Therapy》杂志上。

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　　文章作者是来自斯坦福大学的Mark Kay和他的同事们，在这一题为 “Tracking Adeno-Associated Virus Capsid Evolution by Thigh-Throughput Sequencing”的文章中，研究人员使用高通量筛选带条形码的AAV衣壳库来跟踪定向AAV衣壳的进化。最终目标是能够更快地鉴定出改良的重组AAV载体，以用于临床基因治疗试验。

　　以下是最重要的发现：首先，使用多轮选择并不是必须的，实际上可能适得其反。仅经过一轮选择，即可获得功能有效的AAV变体。另外，具有高MOI的感染颗粒比具有低MOI的感染颗粒更加有效，因为使用低MOI会导致筛选之间的差异更大，并且后者并不是最理想的选择。此外，在已经感染了不同的AAV的细胞中，不同的衣壳蛋白之间会发生竞争。

　　“作者的这项工作正在帮助我们进一步地理解AAV衣壳的定向进化的路径，最终使之不再是'黑匣子'，” Isaac Haidak教授说：“这一发现可能导致新的，更加重要的衣壳蛋白被发现，而在目前的条件下这些衣壳可能会被忽略。”