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结合磁珠实验

这一步仅为基因表达的系列分析 cDNA 合成中实验方案 A 的一部分,在实验方案 B 中,cDNA 已经结合到链霉抗生物素包被的 PCR 试管上,因此不必用磁珠结合。实验材料磁珠试剂、试剂盒Dynabead M-280链霉抗生物素仪器、耗材磁设备实验步骤实验方案 A振荡 lmin 以使 Dynabead M-280 链霉抗生物素重新成为混悬液。将 2X 的 100 ul Dynabeads 转移至 U—个 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。用磁设备固定磁珠,移去上清液。用 200 ul 的 IX 结合及冲洗缓冲液重悬磁珠冲洗 3 次,固定磁珠,移去冲洗液。将 NlaIII 酶消化后的 cDNA 分成两份各 10ul,每份中加入 90ul 的重蒸水和 100ul 的 2X 结合及冲洗缓冲液;混合后加入一份冲洗过的磁珠。混合后,在室温下 W 育 30 min(每 IOmin 混合 1 次)。用磁设备固定磁珠,弃去上清液。......阅读全文

4个参数教你鉴别DNA提取磁珠

1、磁珠的概念磁珠是生物磁珠的简称,是生物化学与材料学的有效结合,磁珠兼具液体流动性和固体磁性材料的特点,在外磁场的作用下可以定向移动和集中,当外磁场撤去后,稍加振荡或抽吸即可均匀分散于液体中。随着生物学研究的深入和材料技术的进步,生物磁珠在生物技术领域的应用越来越广泛和深入。2、磁珠的结构生物磁珠

DNA提取磁珠特性的全面讲解

一、悬浮时间悬浮时间的长短对加样均一性有较大影响,悬浮时间越长的DNA提取磁珠,加样均一性越好。GNT系列的磁珠缓冲液,悬浮时间能稳定在5-10min或30-40min。(测试方法:1ml磁珠溶液,沉降至500ul所用的时间)  二、磁吸时间磁吸时间对实验操作效率有较大影响,磁吸

噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验

实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂TEN

噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验(三)

4. 免疫印迹检测外源蛋白的展示情况pDTSPLAY-B 空载体生成的噬菌体表面不含外源基因,仅有带有 6 个组氨酸标签和 Myc 标签的锚定蛋白(基因 Ⅲ 编码),此蛋白 SDS-PAGE 中的条带在 65 kDa 的位置(实际 Mr 为 45 kDa)。pDISPLAY-B 载体中插入外

关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析

  关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析   文章来源:洛阳吉恩特生物科技有限公司   磁珠法核酸提取在当前生物科技行业内已经受到了越来越广泛的关注,很多公司都开始从传统的核酸提取方式向自动化磁珠法转移,生物磁珠也自然成为关键技术的核心。   最近有很多老师询问,GNT系列

关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析

  磁珠法核酸提取在当前生物科技行业内已经受到了越来越广泛的关注,很多公司都开始从传统的核酸提取方式向自动化磁珠法转移,生物磁珠也自然成为关键技术的核心。   最近有很多老师询问,GNT系列的生物磁珠是否可以回收利用。从理论上来说,磁珠在整个使用过程中,只要性质和结构不发生变化,与目的物质(核酸或

重组蛋白在E.coli中表达及纯化

一. 实验目的1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法;2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白二. 实验原理将目的基因连接在表达载体后,通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外,在终止子前有6个His编码序列,便于蛋白的亲和层析纯化。亲和层析以蛋白质或生物大分子和结

关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析

磁珠法核酸提取在当前生物科技行业内已经受到了越来越广泛的关注,很多公司都开始从传统的核酸提取方式向自动化磁珠法转移,生物磁珠也自然成为关键技术的核心。最近有很多老师询问,GNT系列的生物磁珠是否可以回收利用。从理论上来说,磁珠在整个使用过程中,只要性质和结构不发生变化,与目的物质(核酸或蛋白)的结合

用大片段基因组 DNA 克隆直接筛选 cDNA实验

            试剂、试剂盒 扩增缓冲液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性内切核酸酶 ATP 链霉亲和素-磁珠结

用大片段基因组 DNA 克隆直接筛选 cDNA实验

试剂、试剂盒 扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素-磁珠结合缓冲液T4DNA 连接酶热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶BACDNA缺口平移缓冲液杂交液平末端 cDNACot1 基因组 DNA胞浆 poly(A)+RNAdNTP 溶液DNA 分子质量标志物寡

用大片段基因组 DNA 克隆直接筛选 cDNA实验

本方案使用克隆在 BAC 载体上的一段 500kb 的人基因组 DNA 连续序列,直接筛选与其互补的的 cDNA。但本方法也可适用于任意大小的基因组靶 DNA。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。试剂、试剂盒扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素

最受欢迎的免疫磁珠试剂盒性能大比拼

  细胞因子是机体免疫反应中不同细胞分泌的一类小蛋白质。例如,当白细胞介素4(IL-4)单独发挥作用时,它使得B细胞增殖,并生产出特定类型的抗体。但干扰素-γ(IFN-γ)同时存在时,会减少B细胞的数目并改变它们产生抗体的类型。麦吉尔大学蒙特利尔神经学研究所的实验治疗计划主任Amit Bar-O

膜蛋白的纯化实验

实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近,人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同

膜蛋白的纯化实验

实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能

小磁珠也有大用途

分子诊断是以核酸作为检测对象,主要应用于临床各科的诊断中,如肿瘤、感染、遗传等各方面,而核酸提取是分子诊断实验的“第一步”。通过对磁珠进行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),从而可以实现对核酸的高通量、自动化提取,这一技术产生于20世纪80年代,已经有了成熟的试剂盒并形成为产业。磁珠的用武之地:体外

循环肿瘤细胞的检测方法

  近年来随着现代医学研究技术的进步和CTC临床应用价值凸显,许多研究机构和研发团队都在推出不同的CTC检测技术。由于血液中CTC的含量极低,目前主流的检测方法是先捕获(富集)后检测,少量方法是不捕获(富集)直接检测。CTC检测技术包括CTC的富集(分离)和CTC的分析鉴定(识别)。本篇文章将介绍C

新一代高通量测序技术SOLiD简介

   目前市场上有四种高通量测序仪,分别是Solexa,454 (GS-FLX),SOLiD和Polonator。根据测序原理,它们可以被分为两大类:使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454,及使用连接法测序(Sequencing by Ligation

新一代高通量测序技术SOLiD简介

   目前市场上有四种高通量测序仪,分别是Solexa,454 (GS-FLX),SOLiD和Polonator。根据测序原理,它们可以被分为两大类:使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454,及使用连接法测序(Sequencing by Ligation

高通量测序技术SOLiD简介

目前市场上有四种高通量测序仪,分别是Solexa,454 (GS-FLX),SOLiD和Polonator。根据测序原理,它们可以被分为两大类:使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454,及使用连接法测序(Sequencing by Ligat

Applied Biocode及数码液相芯片技术简介

Applied BioCode,Inc.是一家专注于数码液相芯片技术研发及应用的高科技公司,总部位于美国加州洛杉矶。 数码液相芯片Applied BioCode® 首创的数码液相芯片(Digital Liquid Chip)核心技术,是基于数码磁珠(Barcoded Magnetic Be

疫 磁 珠 法 分 离 B 细胞亚群

实验步骤基本方案材 料抗 凝 血(附 录 3 G) , 或 者 从 全 外 周 血 中(单 元 8 . 1 ) 或 组 织 中(单 元 7. 8 ) 分离的新 鲜 PBM C 或冷藏保存的 PBMC (附录 3B)1 % FBS (热灭活)溶于冷的 PBS (附 录 1 ,无钙离子)中免疫磁珠偶联的

光学磁扭仪和荧光诱导活细胞细胞核蛋白的分解

实验概要机械力在生物过程中发挥着显著作用。这些机械力可以通过骨架长丝网络传送到细胞,诱导胞浆内不同的生化反应。虽然已经有充足的报告显示,细胞质酶可被细胞表面的局部应力直接激活,但一直没有证据表明,机械力可以直接改变核功能,包括卡哈尔体蛋白质复合物的结构变化。本实验描述了通过利用磁场扭曲力改变,流式细

偶联了PECAM抗体的顺磁玻珠分离内皮细胞的实验

实验概要本实验用以血小板内皮细胞粘附分子(PECAM或CD31)为靶分子的活性筛选技术分离和培养纯的人毛细血管内皮细胞。实验原理PECAM是130kDa内膜糖蛋白,属于细胞粘附分子的免疫球蛋白超家族。该分子在细胞中呈组成型表达,基本上为内皮细胞和血小板所独有,只有一些骨髓谱系的亚种例外。PECAM在

错配固相化学切割法实验

            试剂、试剂盒 退火缓冲液 B&W(结合洗脱)缓冲液 dNTP溶液 甲酰胺染液 羟胺

核酸分离与纯化的原则、步骤、磁珠法纯化DNA原理

磁珠提核酸磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤、磁珠法纯化DNA原理。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分

错配固相化学切割法实验

试剂、试剂盒退火缓冲液B&W(结合洗脱)缓冲液dNTP溶液甲酰胺染液羟胺KMnO4 TEAC嘧啶Taq DNA聚合酶Taq DNA聚合酶缓冲液待测和对照基因组DNA仪器、耗材磁力架微孔滴定板或微管振荡器链霉抗生物素蛋白包被的磁珠热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂(1)退火缓冲液

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。磁珠法 纯化DNA原理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸发生吸附反应。硅磁(

核酸提取仪基本原理和特点

核酸提取仪(Nucleic Acid Extraction System)是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸提取工作的仪器。广泛应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。分类:1. 根据仪器型号大小不同划分 [1]

错配固相化学切割法实验(二)

(二)方法1. 均一标记探针的制备(1)取一无菌离心管置于冰上,加入如下组分。基因组DNA              50~100ng引物5A             &

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

    磁珠法纯化DNA原理    磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料,来吸附核