质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定1
实验原理一、DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为 4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'), 有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中, 有的在对称轴处切割, 产生平末端的DNA片段......阅读全文
质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定1
实验原理一、DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的D
质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定2
EcoRI酶及其酶切缓冲液；HindⅢ酶及其酶切缓冲液；琼脂糖(Agarose)。 二、 器材 电泳仪, 台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉, 琼脂糖凝胶成像系统。 操作方法 一、 DNA酶切反应 1. 用微量移液枪向灭菌的eppendorf管
质粒DNA的酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定
[实验原理]限制性内切酶识别短的DNA序列并在识别序列内或旁侧特异性切割双链DNA。对环状DNA有多少切口，就能产生多少个酶解片段，因此鉴定酶切后的片段在电泳凝胶中的区带数，就可以推断酶切口的数目，从片段的迁移率可以大致判断酶切片段大小的差别。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。D
DNA限制性酶切及凝胶电泳，实验原理及方法1
实验原理一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，
质粒DNA的限制性内切酶（restriction－endonuclease,－RE）酶切及..
实验原理： 限制性内切酶（restriction endonuclease, RE）能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。限制性内切酶可分为三类：I、Ⅱ和III类。I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有修饰（甲基
质粒DNA的限制性酶切及电泳分析
原理 限制性核酸内切酶能特异地识别和切割双链DNA中的碱基顺序，本实验中所用的pBS-SK质粒分子总长约2.9kb，经酶HindⅢ切割后，闭合环状质粒DNA即变成线性DNA分子。 不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在琼脂糖凝胶中有不同的电泳迁移率，因而可通过电泳使其分离。
质粒DNA的提取、酶切与鉴定
1. DNA 琼脂糖凝胶电泳 ① 琼脂糖凝胶的制备：称取0.6g 琼脂糖，置于三角瓶中，加入50 mL TBE 缓冲液，经沸水浴加热全部融化后，取出摇匀，此为1.2%的琼脂糖凝胶。 ② 胶板的制备：取橡皮膏（宽约1cm）将有机玻璃板的边缘封好，水平放置，将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左
质粒DNA限制性酶切图谱分析
一、DNA的限制性酶切实验原理核酸限制性内切酶 是一类能识别双链ＤＮＡ中特定碱基顺序的核酸水解酶，这些酶都是从原核生物中发现，它们的功能犹似高等功物的免疫系统， 用于抗击外来ＤＮＡ的侵袭。限制性内切酶 以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键， 产生的ＤＮＡ片段５’端为Ｐ，３’端为ＯＨ。1. 限制性内切酶
DNA酶切及鉴定
实验概要限制酶主要存在原核细胞中。多数来源于细菌，有的来源于蓝藻和链霉菌，极少数来源于支原体等微生物中，存在原核细胞的限制酶能在特异的识别位点切断外源DNA，如感染的噬菌体。而宿主细胞内的DNA则因它的一些特异识别位点常常由于其中一个碱基的甲基化被保护起来，从而使此位点不再成为限制酶的底物。限制性内
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定实验
实验材料琼脂糖试剂、试剂盒溴化乙锭仪器、耗材琼脂糖凝胶电泳装置紫外灯实验步骤1. 琼脂糖凝胶电泳装置 由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高，而适应性又强，在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walter Schaffner发明的水
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定实验
实验材料 琼脂糖试剂、试剂盒 溴化乙锭仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳装置紫外灯实验步骤 1. 琼脂糖凝胶电泳装置 由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高，而适应性又强，在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walter Schaffner
DNA重组技术(Recombinant－DNA)实验原理、用品和步骤（二）
【实验步骤】 1．PCR产物纯化 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，应用凝胶回收试剂盒回收纯化目的DNA片段。 2．目的DNA片段连接至T/A克隆载体 即重组DNA分子的构建 反应体系及条件如下： 3．转化 3.1 将感受态细胞置冰中融解。 3.2 将60μl感受态细胞移至无菌
DNA文库的构建及其筛选
实验材料 DNA试剂、试剂盒 升汞MS培养基琼脂糖EcoR IHind IIIBamH IBg lII Pst I仪器、耗材 电泳仪尼龙膜实验步骤 1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过
质粒DNA的限制性内切酶酶切分析
实验目的学习和掌握限制性内切酶的特性掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。相关基础知识限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。上世纪七十年代，当人们在对噬菌体的宿主
DNA的限制性酶切和琼脂糖电泳
实验原理1、DNA的限制性酶切限制性内切酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此处切割双链DNA。它可分为3类。I类和III类限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰（甲基化）作用和依赖ATP的限制（切割）活性（双功能酶），II类修饰-限制系统是由两种酶分子组
DNA酶切及凝胶电泳（gel－electrophoresis）1
第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位
DNA的酶切与连接——质粒DNA酶切
DNA的连接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一；（2）成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。实验方法原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附
质粒DNA的限制性内切酶消化酶解
原理 限制性核酸内切酶能特异地识别双链DNA中的碱基序列，通过“切割”双链DNA中每一条链上的磷酸二酯键使DNA断裂。利用它可方便地按需要对DNA进行“剪切”加工。限制性核酸内切酶单位的定义为：在限定的温度和反应环境中，1小时消化1μg DNA所需的酶量为一个酶单
质粒的酶切后琼脂糖凝胶电泳检测
最好的酶切结果当然是只有两条条带，如果旁边再跑一个没有酶切的质粒和一个空载（同样的载体但是没有目的片段的质粒）作为对照那会很好说明问题：这两条条带应该是一条很明亮，位置较高（酶切下的线性载体），粗一些，理论上是下面那条比较细的条带（切下的目的片段）的6倍亮度——这个可以根据跑的Marker判断是否为
重组质粒双酶切鉴定
既然你的质粒已经提出来了，那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。 你看看双酶切后载体的位置有几条带，如果是两条，那说明酶切不完全，如果是一条，那说明酶切效率没问题。 pET28a分子量为5.6k，你的插入片段为500bp，如果你的质粒完全切开，载体和插入片段的摩尔比为1：1，质量比就是5.6
DNA限制性酶切及凝胶电泳，实验原理及方法3
二、DNA分子量标准的制备采用EcoRⅠ或HindⅢ酶解所得的λDNA片段来作为电泳时的分子量标准。λDNA为长度约50kb的双链DNA分子,其商品溶液浓度为0.5mg/ml,酶解反应操作如上述。HindIII切割 DNA后得到8个片段,长度分别为23.1, 9.4, 6.6, 4.4, 2.3,
DNA限制性酶切及凝胶电泳，实验原理及方法2
3、 DNA分子的构象当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引
DNA酶切及凝胶电泳
一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶
DNA酶切及凝胶电泳
第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处
DNA酶切及凝胶电泳
实验概要本文介绍了DNA酶切及凝胶电泳的实验原理、仪器试剂和操作步骤等。实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正
重组克隆筛选（酶切鉴定）
【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理；2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统，其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说，重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
我硕士专业是分子生物学这方面的,我可以很负责地告诉你,质粒DNA分子具有三种构型：共价闭合环开DNA（cccDNA,SC构型）、开环DNA（OC构型）和线性分子（L构型）.在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
质粒DNA分子具有三种构型：共价闭合环开DNA（cccDNA,SC构型）、开环DNA（OC构型）和线性分子（L构型）.在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率.其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
质粒DNA分子具有三种构型：共价闭合环开DNA（cccDNA,SC构型）、开环DNA（OC构型）和线性分子（L构型）.在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率.其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性
质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写实验目的：1．掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。2．掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。3．掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。基本原理限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶（水解磷酸二酯键）。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具