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免疫PCR

免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特异性PCR产物的有无,来判断待测抗原是否存在。实验方法原理主要由两个部分组成,第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定过程;第二部分即通常的PCR检测,抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中,首先用待测抗原(如牛血清白蛋白(ESA))包被微滴板孔,再加入相应的特异抗体,于是抗体就与固相上的抗原结合形成抗原抗体复合物,蛋白A-链亲合素(Protein A-Streptavidin)嵌合体(重组融合蛋白)中的蛋白A部分可与固相上抗原抗体复合物中的抗体IgG结合,而链亲合素部分可与生物素化的pUC19(质粒DNA) (Biotin-p......阅读全文

定量PCR的新技术

1992年,Sano等人将免疫测定技术与PCR结合,创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术,即免疫-PCR(Immuno-PCR),随着这种技术的不断发展,2000年,Sim等使用荧光定量PCR代替普通PCR,发展了免疫定量PCR技术(real-timeimmuno-PCR)。该技术把抗原抗体反

免疫PCR的基本原理

    免疫PCR的基本原理1.定义  免疫PCR(immuno polymerase chain reaction,IM-PCR)是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结

免疫PCR法检测有哪些特点?

免疫PCR法检测有哪些特点?:免疫PCR综合了固相免疫反应和PCR两者的特点。因而在保证免疫测定特异性的同时,又具有极高的检测灵敏度。免疫PCR的基本原理与执业护士网常规标记免疫技术相似,只不过在免疫PCR中所用的抗原或抗体标记物为DNA,在固相免疫结合反应完成后,再采用PCR技术对标记DNA进行扩

免疫PCR(Immuno-PCR)概念、组成和免疫PCR产物的检测

(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng

免疫PCR[Im-PCR, Immuno PCR]基本原理、试验程序和操作方法-1

一、定义;免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方

免疫PCR实验

实验方法原理 免疫PCR主要由两个部分组成,第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定过程;第二部分即通常的PCR检测,抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中,首先用待测抗原(如牛血清白蛋白(ESA))包被微滴板孔,再加入相应的特异抗体,于是抗体就与固相上的抗原结

免疫PCR[Im-PCR, Immuno PCR]基本原理、试验程序和操作方法-4

3 PCR产物的检测与定量技术 1)凝胶检测系统 用凝胶扫描仪或计算机辅助视频设备对溴化乙锭染色的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶进行定量,放射性标记的扩增产物可通过放射自显影定量测定,最近用自动DNA 测序仪检测荧光标记的核酸,这种方法可准确测量扩增产物的大小,而且其检测灵敏度达fg水平,

免疫PCR

免疫PCR             实验方法原理 主要由两个部分组成,第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(EL

免疫PCR(Immuno-PCR)概念和基础

(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng

免疫PCR系列五-免疫PCR要点与注意事项

一、免疫PCR要点(1)连接分子免疫PCR需要适当的连接分子连接报告分子和抗原抗体复合物。1 992年Sano用重组的链亲和素-蛋白A嵌合体作为连接分子,创立了免疫PCR技术。该融合蛋白的蛋白A可结合抗体的Fc段,链亲和素可结合DNA分子上的生物素,Sano利用此连接分子把一段生物素化的DNA(PU

免疫PCR[Im-PCR, Immuno PCR]基本原理、试验程序和操作方法-2

4DNA和PCR系统 免疫PCR中的DNA是一指示分子,用DNA聚合酶将结合于固相上的DNA特异放大,由此定量检测抗原。免疫PCR的敏感性高于ELISA主要是应用了PCR强大的扩增能力。免疫PCR中的DNA分子可以选择任何DNA,但要保证DNA的纯度,且有较好的均质性,尽可能不选用受检样品

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大,则指

生物技术在食品检测中的应用研究

  摘 要:当代社会人类对食品安全的关注度越来越高,相应的食品检测技术也得到不断改善。其中生物技术挥了重要的作用,PCR技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)、PCR-免疫技术(PCR-ELISA)、免疫亲合色谱(IAC)、生物芯片(Biochips) 等技术以各自的优点,被广泛地运用于食品检测领域。

略谈生物技术在食品检测中的应用

  摘要:当代社会人类对食品安全的关注度越来越高,相应的食品检测技术也得到改善。其中生物技术也挥了重要的作用,PCR技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)、PCR-免疫技术(PCR-ELISA)、免疫亲合色谱(IAC)、生物芯片(Biochips)等技术以各自的优点,被广泛地运用于食品检测领域。&nb

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

原位免疫PCR的IHC增敏方法原理和操作流程

(一)基本原理Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检测蛋白

PCR技术应用进展

   PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织

PCR技术(六):PCR技术应用进展

PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织细胞里进行PCR

免疫PCR技术(Immuno-PCR)

免疫PCR技术(Immuno-PCR) 免疫PCR方法(Immuno-PCR)是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术,具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性,使实验中只需数百个抗原分子即

免疫PCR技术材料方法和注意事项(二)

4. 免疫PCR 将生物素标记的抗体与亲和素按等分子浓度混合于含有1mg/mlBSA的PBS中,室温孵育30min,再加入两倍分 (1) 按常规ELISA方法,用饱和缓冲液稀释抗原,加到96孔塑料板或0.5mlPCR管中,4℃过夜。 (2) 用PBS洗三次,然后每孔加2

免疫PCR技术

(一)材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备  免疫球蛋白(如IgG、IgM)的Fc片段上有糖基存在,因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。(1) 将纯化的抗体(IgM或IgG, 0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc,pH

IVD行业之分子诊断产业链分析

  上游是原料供应商,包括诊断酶、引物、反转酶、探针等生物制品,高纯度氯化钠、无水乙醇等精细化学品,以及提取介质材料;  中游是分子诊断试剂和仪器制造商,包括罗氏、赛默飞、达安基因、科华生物、之江生物、湖南圣湘等;  下游是使用仪器或试剂的用户,包括医院、 第三方医学实验室、血站、体检中心等。  从

原位免疫PCR的IHC增敏方法

(一)基本原理Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检测蛋白

免疫PCR试验方法全解析

*、材料与方法【生物素标记特异性抗体的制备】  免疫球蛋白的Fc片段上有糖基存在,因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。  ① 将纯化的抗体(IgM或IgG,0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc,pH值5.5,0.1Mol/L

ACG找到提高幽门螺旋杆菌检测率的方法

根据美国胃肠病学会(ACG)2011年度科学会议和研究生课程的一项研究结果称,2011年11月1日(国家海港/华盛顿) - 应用聚合酶链反应(PCR)检测到的幽门螺旋杆菌患者数量是免疫组化法(IHC)的两倍以上。本文的第一作者,马里兰州消化中心医疗顾问,巴尔的摩的约翰霍普金斯大学医学院的医学助理教授

试管婴儿植入前遗传学诊断单细胞PCR的方法(1)

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)简称PCR技术,是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术,由于其可使特定DNA片段在数量上呈指数增加至可检测范围,故成为基因诊断的重要方法。在PCR基础上衍生的一些扩增技术已用于基因突变的诊断。目前单基因疾病P

我国体外诊断行业(IVD)市场与需求

  1. 什么是体外诊断(IVD)行业?  IVD是指在人体之外通过对人体的血液等组织及分泌物进行检测获取临床诊断信息的产品和服务。我国医院里俗称的“检验检查”中的“检验”包括了IVD的大多数细分种类——如①生化诊断(clinical chem)、②免疫诊断(immunoassay)、③分子诊断(M

试管婴儿植入前遗传学诊断单细胞PCR的方法

  聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)简称PCR技术,是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术,由于其可使特定DNA片段在数量上呈指数增加至可检测范围,故成为基因诊断的重要方法。在PCR基础上衍生的一些扩增技术已用于基因突变的诊

大肠杆菌的检测方法

  随着人们生活水平的提高,食品安全问题受到越来越多的重视,在不断被报道的食品安全事故中,大肠杆菌是引起这些事件的主要的影响因素之一,是判断食品污染程度的一个重要参数,因此采用快速、可靠、简便的方法来准确检测食品中大肠杆菌数量是否超标是至关重要的。本文综述了大肠杆菌的传统检测方法以及最新的