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应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法 实验材料 质粒 试剂、试剂盒 DNase 缓冲液 EDTA 溶液 TBE 缓冲液 丁醇 转化盐储液 氨芐储液 悬浮缓冲液 硼酸缓冲液 仪器、耗材 水浴锅 分光光度仪 分光荧光计 ......阅读全文
实验材料质粒试剂、试剂盒DNase 缓冲液EDTA 溶液TBE 缓冲液丁醇转化盐储液氨芐储液悬浮缓冲液硼酸缓冲液仪器、耗材水浴锅分光光度仪分光荧光计实验步骤本章主要介绍提高蛋白质热稳定性的常规方法，而不需要在高温下筛选酶活性。介绍完 β 内酰胺酶模型系统（见 16.3.1 )，我们描述末端截切（见
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
实验材料 质粒试剂、试剂盒 DNase 缓冲液EDTA 溶液TBE 缓冲液丁醇转化盐储液氨芐储液悬浮缓冲液硼酸缓冲液仪器、耗材 水浴锅分光光度仪分光荧光计实验步骤 本章主要介绍提高蛋白质热稳定性的常规方法，而不需要在高温下筛选酶活性。介绍完 β 内酰胺酶模型系统（见 16.3.1 )，我们描述末
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接
3.5 DNA 混编和随机突变逆转由末端截切或删除突变造成的结构干扰的关键优化步骤是在遗传水平上建立高度可变的突变库。随机突变与 DNA 重组的结合能够满足这样的突变需求。DNA 混编 [ 15，16 ] 是在试管里进行 DNA 重组的广泛应用的方法。由 DNA 混编方法将不同源的基因混杂在
Rnai最近由于RNA 干扰（RNA interference，RNA i）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在 RNA i领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA 干扰是
定义 聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）， 聚合酶链式反应具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异
分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN
3.7 全长突变体的构建优化的 N△5-S3/6 被再延长来研究突变对被截切后的不稳定蛋白质的互补作用。根据图 16.2A，被截切的氨基酸重新被加上，从而得到全长基因——被命名为 FL-S3/6 的克隆。这个突变体定位在细胞间质，在 E.coli XL-1 Blue 中表达来检测体内功能。让
1. Cell：中科院生物物理所王艳丽/章新政课题组从结构上揭示Cas13a切割RNA机制 doi:10.1016/j.cell.2017.06.050 CRISPR/Cas系统是目前发现存在于大多数细菌与所有的古菌中的一种免疫系统，被用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。在CR
3.8 蛋白质表达及纯化 β-内酰胺酶突变体（野生型间质定位的、野生型胞质定位的、N△5、优化的 N△5-S3/6、N△5- S5/S7 和 FL-S3/6 胞质定位的突变体）在 lac 启动子下于 E.coli 细胞中带 His -tag 融合表达（见 16.3.8.1)。通过两步纯化反
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
George Church：分子技术专家，DNA研究领域的领军人物，哈佛大学遗传学教授，哈佛医学院基因组研究中心主任。他于1985年参与到人类基因组计划，也是这个计划的负责人。他发明的新方法开创了个人基因组研究的时代。基于他发明的直接基因组测序的方法，自动测序软件被成功开发，并在1994年第一次
利用 DNA 混编模仿自然进化过程是优化 DNA 和蛋白质性质的常用方法。这里我们介绍这类方法的一个新进展，即利用标准的聚合酶链反应（PCR)放大基因文库时与其他 4 种标准 dNTP—起掺入 dUTP 作为确定 DNA 碎裂位点的交换核苷酸。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特
酶切基础知识DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切第一节 DNA酶切及凝胶电泳 一.DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在
最近由于RNA干扰（RNA interference，RNAi）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA干扰是由长的双链 RNA
第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
实验概要一种比较详细的PCR技术实验原理1. TaqDNA聚合酶在早期进行的PCR反应中，使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段，即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性，DNA合成反应只能在37°C进行。PCR时每一循环的解链温度都
慢性乙型病毒性肝炎影响着全球超过 2.5 亿人口，每年约有 65 万人死于 HBV 相关终末期肝病。共价闭合环状（ccc）DNA 是慢性乙肝持续感染的元凶，作为病毒复制的中介，其在宿主肝细胞核内以微染色体的形式存在，目前的治疗手段难以将其彻底清除，从而达到慢性乙肝的彻底治愈。 Gut 杂志上发
一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多DNA序列信
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多DNA序列信息仅
截至2019年12月23日，中国学者在Cell，Nature及Science在线发表了107篇文章（2019年的Cell ，Nature 及Science 已经全部更新），iNature团队对于这些文章做了系统的总结： 按杂志来划分：Cell 发表了31篇，Nature 发表了44篇，Scie
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
一、杂交通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
进化遗传学具有两个并列的研究方向：系统发育的重建和种群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志 现存物种分化的时间以来，各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内， 同功酶的电泳分析、免疫学比较和蛋白质序列分析被广泛地应
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，N
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，N