如何提高PCR产物克隆的效率
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biolabs公司的Vent酶，以及QIAGEN公司新出的同时具有热启动功能的高保真ProofStart酶，进行PCR扩增，由于这类酶有很强的校读功能，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候......阅读全文
如何提高PCR产物克隆的效率
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biol
如何提高PCR产物克隆的效率
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biol
如何提高PCR产物克隆的效率
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法： 1. 直接克隆到T载体（或者U载体上） 2. 引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上 3. 将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，NewEngland
PCR产物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cl
PCR产物克隆
克隆方法：1. 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3''末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3''突出一个碱基的DNA分子。这种DN
PCR产物克隆
克隆方法：1. 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3''''末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'''&#
PCR产物的克隆
PCR 产物的克隆 PCR 产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的 PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V 或 Sma I 切成平头； PCR 产物纯化后，可以在 22 ℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具
PCR产物的克隆
PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
PCR产物的克隆
PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR 产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
如何提高PCR的扩增效率
P不出来，如果引物没有问题那就是反应条件没有设置好了首先看看你所用的酶的效率（普通Taq酶的效率为0.8~1.2kb/s），延伸时间是不是太短了，再看看酶活性是不是还好，做个阳性对照其次看看退火温度，是不是过高或者过低再次看看你的模板，如果是基因组DNA，跑跑胶看看有没有降解，量加的够不够（基因组属