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蛋白质提取与纯化技术

选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性,防止酸、硷、高温,剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期......阅读全文

蛋白质提取与制备

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法,包括冻干、反向萃取、溶质析出,precipitation、透析(溶剂交换) 、超滤和层析技术。值得注意的是,在众多微和设备发展的支持下,小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

蛋白质浓缩和溶质的去除实验             实验步骤 一、层

蛋白质组学概念的起源和发展

  蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动了蛋白质组学的成长,使之在精准医疗领域展示出越来越大的应

蛋白质分离纯化的新技术及技术要点

浅述蛋白质分离纯化的新技术摘 要: 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术,综和近年来国内外的一些研究结果,结合实际应用的例子,分析了各种分离纯化方法的优点,同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。&nbs

蛋白质的分离纯化

一,蛋白质(包括酶)的提取  大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。(一)水溶液提取法  稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验(三)

四、细胞裂解的流程、试剂和技巧下文所述的以细胞提取物的产品质量为出发点的各种策略和指导方针适用于大多数下游纯化及分析过程。尽管介绍的重点是在小规模或较大的实验室规模的大肠杆菌裂解上,但是一些技术还是可以用于其他来源的细胞裂解和细胞内蛋白质提取,并且是可以放大的。广泛的蛋白质纯化方面的文献为这里列出的

抗原的制备方法-2

表2-1 室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数  0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242

CBPT生物制药分离纯化技术论坛

  作为中国领先的生物制药技术推广平台,由中国生物工程学会《生物产业技术》杂志社主办,北京中航环宇国际文化交流中心承办的“CBPT生物制药分离纯化技术论坛”在生物医药行业专家领导和朋友们的支持下,已连续成功举办了两届。是生物医药技术领域规模最大、学术水平最高、科研成果最新和专业性最强的年度行业盛会,

广东检验检疫局在食用植物油检测技术上取得突破

日前,广东检验检疫局技术中心科研人员经过近三年的刻苦攻关,一举攻克食品分子生物学检测国际难题,圆满完成食用植物油脂基因检测ISO国际标准研 制的全部实验研究工作,其主要科研成果食用植物油脂中核酸提取纯化技术,已通过多家验证单位的实验验证,在食用植物油脂中转基因成分检测和成分物种鉴别等 相关检测业务中

广东检验检疫局 攻克食品分子生物学国际检测难题

日前,广东检验检疫局技术中心科研人员经过近三年的刻苦攻关,一举攻克食品分子生物学检测国际难题,圆满完成食用植物油脂基因检测ISO国际标准研 制的全部实验研究工作,其主要科研成果食用植物油脂中核酸提取纯化技术,已通过多家验证单位的实验验证,在食用植物油脂中转基因成分检测和成分物种鉴别等 相关检测业务中

China Lab 2014技术研讨会主会场演讲报告

  2014年3月12日,由广东省对外科技交流中心、国药励展展览有限责任公司、广东国际科技贸易展览公司主办的广州国际分析测试及实验室设备展览会暨技术研讨会(China Lab 2014)在广州保利世贸博览馆盛大开幕。12日上午召开的中国(广州)分析测试论坛主会场共邀请到诸位专家学者就蛋白质的

赛默飞世尔科技:为蛋白质组学提供深层次解决方案

  定量蛋白试剂盒  在蛋白分析相关的试剂消耗品方面,Thermo Fisher Scientific都是直接在仪器上开发的。由于试剂和仪器时配套的,从而能够提高分析效率。例如细胞培养氨基酸稳定同位素标记技术(SILAC)和串联质谱标签(tandem mass tag)试剂盒。  细胞培养氨基酸稳定

蛋白质纯化的方法选择

随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆的下

临床检验科常见设备和主要供应商大全

临床检验常见设备包括:一、临检设备:血细胞分析仪、流式细胞仪、血凝分析仪、尿液干化学分析仪、尿液有形成分分析仪、粪便分析仪二、生化免疫设备:生化分析仪、化学发光免疫分析仪、酶免疫分析仪、荧光免疫分析仪三、分子诊断设备:核酸提取仪、实时荧光PCR仪、基因测序仪、质谱仪四、微生物检验设备:微生物鉴定药敏

【分享】蛋白纯化的方法选择

  随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆

多项仪器研发项目列入863计划和2014备选项目

  一、前沿生物技术主题  1.蛋白质测序新技术新装备及配套试剂国产化  (1)阵列毛细管柱蛋白质分离-阵列点样装置  研制二维阵列毛细管分离新装置,第一维分离柱可分离48个馏分,第二维维阵列毛细管分离柱可同时分离48个流份;开发阵列紫外检测器; 研制多柱点样头并行点样器和流份收集器;开发

高通量组织gDNA提取实践手册

Part 1 —— 前 言 | 组织gDNA提取和纯化是分子生物学的基本实验技术,其原理和操作绝大数生物学相关的研究人员都有接触。困扰实验人员的是当样本量过大时,以1.5ml离心管为基本体系的组织核苷酸提取模式,同时操作20个以上的样品有非常繁琐的实验过程和样品间有错乱

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α(+)载体的构建

表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具,本文总结了pET-32α(+)载体技术的构建,该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段,将DNA片段亚克隆到pET-32α(+)表达载体中,在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进

抗原的制备-2

 2.核酸的分离纯化  从细胞中提取核酸后,仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。除去这些“杂质”的过程,也就是核酸提纯过程。在核酸的分离纯化时,为防止核酸大分子的变性降解,必须在0~4℃的低温条件下操作。核酸酶的水解作用,是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍,现普遍采用加入去污剂或加入E

自动化核酸提取、检测和定量平台

在现今分子生物领域中,样本的核酸提取、检测和定量已是每个实验室常用的实验手段。近年,实时定量PCR和第二代测序技术的诞生更令核酸提取的需求大大增加。这些新的核酸检测技术对核酸的纯度要求比较高,所以核酸提取的质量也比以前更受注重。另一方面,准确的核酸定量对于这些新技术,如第二代测序,起了成败的关键作用

蛋白质谱分析方法特点及其在蛋白组学研究领域中的应用

褚福亮,王福生, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生, 100039 ,北京市丰台路26号, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.b

检测自身免疫抗体的蛋白质芯片技术简介

  检测自身免疫抗体的蛋白质芯片技术   自身免疫性疾病是由异常免疫反应引起的慢性退行性或炎症性疾病。不同的自身免疫性疾病对机体的影响各有不同。例如,在多发性硬化症中,自身免疫反应的侵害对象是中枢神经系统,而在克罗恩病中则是肠道。此外,同种疾病对不同个体的组织和器官的影响程度不尽相同。   此类

2009年北京色谱年会隆重召开

  2009年12月11日上午9时许,由北京理化分析测试技术学会色谱学会主办的2009年北京色谱年会在京东宾馆第一会议室隆重召开。来自全国色谱界专家、厂商技术专家、青年研究者和学生300余人参加了会议。 2009年北京色谱年会会场     中科院化学所 刘国诠教授  &

现代生物分离技术在多肽蛋白质分离纯化中的应用

摘要:蛋白质是生物体的重要组成部分,在现代生物制药领域有着重要的作用,本文介绍了现代生物分离技术反胶束萃取、双水相萃取和电泳在多肽蛋白质分离中的应用和现状。关键词:蛋白质  反胶束萃取  双水相萃取  电泳一、前言随着基因工程和细胞工程的发

亲和层析实验:常规方法

实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。

亲和层析实验:常规方法

实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过

蛋白质特性与分离纯化技术的选择

摘要:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质提纯的方法。关键词:蛋白质 分离纯化前言    蛋白