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WesternBlot操作步骤

背景: 蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两种技术的称为Northern和Western,与这两个技术的发明人没有关系了。 一、蛋白质的样品制备: 由于这一步方法各异,具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Western Blotting的第一步,样品制备是关键步骤,要求尽可能的获得所有蛋白质,应注意以下问题: > 在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。 > 选择合适的表面活性剂和还原剂,破坏所有非共价结合的蛋白质复合......阅读全文

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

蛋白质印迹法速成知识ABC

  蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。  蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较

  Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或

Western Blot详解-常见的问题指南(一)

 实验常见的问题指南根据问题的类型主要分成以下几类(以下资料权作参考,请勿盲目模仿!):1. 参考书推荐A. 对初学者看什么资料比较好?解答:《抗体技术实验指南》和Antibodies(a laboratory manual, wrote by Ed Harlow ,d

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

水平电泳仪选型

     Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:      从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)      十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电

Western Blot详解(二)

11、NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒,戴手套操作),溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5),500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)-2

四、主要步骤 生物秀为您搜集了现阶段几乎网上所有的Western Blot的中英文资料,仅供实验参考,可以根据自己实验的实际情况进行调整: Western Blot PROTOCOL: 点击查看所有相关文章 五、 实验常见的问题指南 根据问题的类型主要分成以下几类(以

Western blot分析的自动化不再是梦想

  Western blot是检测蛋白质的一项经典技术,几十年来一直受到人们的欢迎。不过,令人尴尬的是,这也是一个相当耗时并且难以重现的过程,有时带来惊喜,有时则是惊吓。  典型的Western blot流程大家都清楚,首先是蛋白电泳,分离后将蛋白质转移到膜上,然后进行一系列的处理,包括封闭、一抗孵

Western Blot常见问题总结

  Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与或标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电

Western Blot内参的选择不容忽视

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――

如何做出一手漂亮的Western Blot实验结果?

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们

5分钟学会如何选择4款全自动Western blot仪器

  Western blot,无疑是个老话题。然而,正是由于新产品的陆续问世,这颗老树才不断开出新花。两年前曾经介绍了全自动的Western blot分析系统 – Simple Western。这台名叫Simon的神奇仪器将WB的所有实验步骤自动化,包括蛋白上样和分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据的

如何获得精准的Western Blot实验结果

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们,实验做

Western Blot实验操作进阶技巧(一)

  除非是Western blot实验方面的高手,要不就像在我看来,Western blot发展至今好像与其1979年刚被发明出来的时候一样一样,同样也是根据蛋白不同的大小(或电荷)进行电泳分离,然后转膜,利用抗体筛选出目标蛋白。  多年来这种技术已经成为了蛋白研究方面的一种主要技术,研究人员可以利

Westernblot实验步骤及注意事项

Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA),PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃4.

Western实验中内参基因的选择及使用方法

相关专题western blot实验western blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然,顺利的时候western blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦

免疫印迹western实验中内参蛋白的选择和注意事项

  免疫印迹western实验中内参基因的选择和注意事项   Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。   虽然,顺利的时候Western blot做

如何获得精准的Western Blot实验结果

  蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们,实

如何获得精准的Western Blot实验结果

  蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们,实

如何获得精准的Western Blot实验结果

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们

全自动Wes蛋白印迹让大分子量蛋白不再“难测”

  不管是基础研究还是转化医学,特定样本中特定蛋白质的表达情况可为研究者提供丰富的生物学信息。如临床样品中疾病特异性Biomarker的检测定量可作为疾病诊断、病患分型及疗效评估的重要参考依据;药物筛选活动中,也常常通过药物靶标及其下游通路蛋白的表达量或修饰状态来评估潜在的药效。著名的抗白血病药物G

免疫印迹western实验中内参蛋白的选择和注意事项

Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然,顺利的时候Western blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、

Western实验中内参基因的选择及使用方法

Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然,顺利的时候Western blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现

如何获得精准的Western Blot实验结果

蛋白质免疫印迹杂交实验(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中最经典和最广泛为业界认可的一种,也是论文中最常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单,但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差,导致刚进实验室的小伙伴们

WB新时代开启 GE医疗发布Amersham WB蛋白免疫印迹系统

  2014年9月24日,2014慕尼黑上海分析生化展在上海新国际博览中心隆重拉开帷幕。GE医疗生命科学亮相2014慕尼黑上海分析生化展,举办新品发布会全球同步发布Western