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实验材料悬浮培养物试剂、试剂盒胞外缓冲液ATP 储存液实验步骤1. 约在实验开始前 1 小时，用 50 ml 灭菌试管以 1000 g 离心悬浮培养物 5 分钟，用 40 ml 左右胞外缓冲液清洗细胞两次。用预热至 37℃ 的胞外缓冲液重悬细胞至 107 细胞/ml。于 37℃ 轻轻摇动 15~30 分钟，让细胞达到平衡。2. 1000 g 离心 5 分钟，吸去缓冲液。往新鲜透化缓冲液中加链球菌溶血素 O 至每毫升 0.6 单位，该溶液已先加了冷 ATP 至100 μmol/L 进行预平衡。将这透化溶液加入细胞中，轻轻地混匀。3. 于 37℃ 温育 1~5 分钟。4. 加 [γ-32P] ATP 储存液至终浓度 50~500 μCi/ml。5. 加入要研究的实验试剂，如药理试剂、多肽、Fab' 片段，放置一段时间让它们发挥作用。6. 加入所需的受体激动剂。7. 制备免疫沉淀样品或者 PAGE 样品。(1) 加入......阅读全文
实验材料 悬浮培养物 试剂、试剂盒 胞外缓冲液ATP 储存液 实验步骤 1. 约在实验开始前 1 小时，用 50 ml 灭菌试管以 1000 g 离心悬浮培养物 5 分钟，用 40 ml 左右胞外缓冲液清洗细胞两次。用预热至 37℃ 的胞外缓冲液重悬细胞至 107
实验材料 细胞培养物 试剂、试剂盒 HEPES 仪器、耗材 培养基 实验步骤 1. 约在实验开始前 1 小时，将细胞培养物换上含有预热（37℃）的 20 mmol/L HEPES（pH 7.2）的培养基，继续培养。让细胞在实验前与新培养基达成平衡。
试剂的制备 单层培养细胞的透化 悬浮培养细胞的透化 用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化 用分离的亚细胞组分进行激酶分析
试剂的制备单层培养细胞的透化悬浮培养细胞的透化用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化用分离的亚细胞组分进行激酶分析试剂、试剂盒胞外缓冲液 胞内缓冲液
试剂、试剂盒 胞外缓冲液胞内缓冲液透化缓冲液标准裂解缓冲液裂解缓冲液SDS-PAGE 加样缓冲液双向-PAGE 裂解緩冲液 实验步骤 这些试剂在后面许多地方要用到，应在进行下述实验前配好。 1. 胞外缓冲液（pH 7.2，37℃） 110 mmol/L NaCl 10
从标记的细胞或者细胞裂解物中提取ATP 用发光分析定量测定ATP 用高效液相层析定量测定ATP 测定[γ-32P]ATP的比活性 实验步骤 1.从标记细胞提取ATP 1) 备下列材料： 本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。
从标记的细胞或者细胞裂解物中提取ATP 用发光分析定量测定ATP 用高效液相层析定量测定ATP 测定[γ-32P]ATP的比活性
1.从标记细胞提取ATP 1) 备下列材料： 本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。 冰冷的4%高氣酺（v/v) 三-n-辛胺 1,1,2-三氮三m乙烷 32p标记的细胞 带螺帽的聚丙烯离心管 测量范围PH4~8的PH试纸 小心：高氣酸■ 三-n
从标记的细胞或者细胞裂解物中提取ATP 实验步骤 1.从标记细胞提取ATP 1) 备下列材料： 本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。 冰冷的4%高氣酺（v/v) 三-n-辛胺 1,1,2-三氮三m乙烷 32p标记的细胞 带螺帽的聚丙烯
用发光分析定量测定ATP 实验步骤 Sigma公司提供了 -种测定MP浓度的非常简单，灵敏&又方便的方法。其原理是用荧光素酶从荧光素和ATP中产生光。在荧光素/荣光素酶浓度恒定的情况下，可以绘制一条不同ATP浓度时产光量变化的标准曲线，因此可以很容易地对来自细胞裂解物的未知样品进行