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GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

实验材料 进行转染的细胞株 按第二阶段所介绍的方法制备表达了蛋白质探针的细胞 试剂、试剂盒 N-二羟乙基甘氨酸 消化缓冲液 N N-二甲基甲酰胺 磷酸钠 磷酸盐缓冲溶液 TE 木瓜蛋白酶 Cy3 和 Cy5 OSu 单功能硫代吲哚花菁琥珀酰亚胺酯 抗体 SDS-聚丙烯酰胺凝胶 明胶溶液 聚-L-赖氨酸 质粒 DNA GFP 融合载体 ......阅读全文

饶毅:美妙的生物荧光分子与好奇的生物化学家

下村修 做出应获诺贝尔奖工作的科学家,几十年默默无闻;  被广泛应用的分子,很少人知其发现者; 原始论文鲜为人知,后继论文倒很热门;  曾失明的人,发现了美丽的发光蛋白; 低调的父亲,出了高调的儿子。  这里简介一项生物化学研究,讲一个科学家的故事,

激光扫描共焦显微镜技术及应用(二)

五、激光扫描共焦显微镜技术的应用定位、定量三维重组动态测量¨ 活细胞或组织内游离Ca2+浓度的测量¨ 活细胞内H+浓度( pH值)的测量¨ 自由基的检测¨ 药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 应用:细胞膜电位的测量      荧光漂白恢复(FRA

荧光探针研究获进展 实现单一波长激发双色荧光成像

  近日,中国科学院深圳先进技术研究院副研究员储军主持研发的新型大斯托克斯位移荧光蛋白取得突破,实现了在小鼠脑内单一波长激发双色荧光成像和高灵敏的生物发光成像。该工作以A bright cyan-excitable orange fluorescent protein facilitatesdual

生物物理所基于光致电子转移扩展荧光蛋白的传感性质

  9月11日,美国化学会杂志JACS 在线发表了中国科学院生物物理研究所王江云研究组的最新研究成果——《基因编码非天然氨基酸作为光致电子转移探针扩展荧光蛋白的传感性质》。该研究利用基因密码子扩展技术,实现了在活细胞中编码一系列卤代酪氨酸(3-氯代酪氨酸(ClY)、3,5-二氯代酪氨酸(Cl2Y)、

生物大分子相互作用检测技术新进展

荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团 (fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象。FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的有效

高灵敏度的生物发光探针问世

   近日,中国科学院深圳先进技术研究院副研究员储军主持研发的新型大斯托克斯位移荧光蛋白取得重要突破,实现了在小鼠脑内单一波长激发双色荧光成像和高灵敏的生物发光成像。  这里的斯托克斯位移指的是荧光物质的最大发射波长和最大激发波长之差,差值若大于100 nm,则认为该荧光蛋白具有大斯托克斯位移的特性

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

何为荧光共振能量转移技术

一、FRET技术基本原理荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时,当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态,在该电子回到基态前,通过偶极子相互作用,实现了能量向邻近的受体分子转移(即发生能量共振转移)。FRET是一种非辐射能量跃迁,通过分子间的电偶极相互作用,将供体激发态能量转移

日科学家研制基因编码“温度计” 可潜入细胞测温度

  如果你问一个生物学家,某个细胞下一步会做什么?他可能先要问你该细胞的电压、氧化性、pH值、渗透性、葡萄糖浓度等等,然后才可能据此预测它是正要发起一个动作电位,还是要进入有丝分裂,抑或正在走向凋亡。但如果你能轻松地得到亚细胞范围的温度曲线图,比如每个线粒体、中心粒甚至内质网区的温度,就像母亲给孩子

日科学家研制基因编码“温度计” 可潜入细胞测温度

  如果你问一个生物学家,某个细胞下一步会做什么?他可能先要问你该细胞的电压、氧化性、pH值、渗透性、葡萄糖浓度等等,然后才可能据此预测它是正要发起一个动作电位,还是要进入有丝分裂,抑或正在走向凋亡。但如果你能轻松地得到亚细胞范围的温度曲线图,比如每个线粒体、中心粒甚至内质网区的温度,就像

专家经验谈:活病毒成像指南

  对于大多数生物学过程来说,所见即所得。由于病毒在感染性疾病中的作用,许多生物学家希望能够实时观察病毒的活动。要观察病毒感染细胞和病毒装配的过程,荧光成像是少数几种非介入性的途径之一。进行这样的研究需要带灵敏相机的高质量显微镜,能支持每秒多次成像。还需要确认荧光标签和实验设置不会干扰到我们想要研究

多位专家指导:如何进行多种成像实验

  超高分辨率显微镜赋予了人们突破衍射极限的能力,研究者们在这一技术的帮助下已经获得了许多固定样本的漂亮图像。不过,用超高分辨率显微镜进行活细胞成像,将是一个更大的挑战。  样品制备的重要性  样品质量对于超高分辨率显微镜而言特别重要,这一点与传统显微成像是一致的。在初次涉足超高分辨率成像时,之前的

2016国际荧光前沿技术高端论坛(FluoroFest)在京开幕

  分析测试百科网讯 2016年4月19日,2016国际荧光前沿技术高端论坛(2016 FluoroFest)在北京大学开幕。FluoroFest 是一个全球性的荧光学术论坛,旨在促进相关领域的广大科技工作者交流最新荧光技术,推动跨学科及领域的经验分享与合作。

荧光共振能量转移(FRET)

一、活细胞研究遇到的问题:蛋白质或其他分子在活细胞内互相结合的时间和地点是了解它们功能的关键问题。要回答这一问题,需将蛋白质标上不同的荧光团。但是,光学显微镜的分辨率将蛋白质检测精度限制在大约0.2μm左右。要研究蛋白质成分的相互物理作用,需要高的分辨率。二、什么是FRET?FRET就是采用非放射方

《环球科学》2011年十大科学新闻评选

  “十大科学新闻”评选是《环球科学》(《科学美国人》杂志中文版)每年一度的重头戏,也是本年度全球各大科学领域的重大事件进行的一次全面盘点。经过专业编辑和专家团队的商讨,《环球科学》初步挑选出了30条候选新闻,接受网友的点评和投票。  1、超光速粒子挑战爱因斯坦相对论  9月23日,欧洲核子研究中心

美制成首个活细胞激光器

  美国马萨诸塞州综合医院研究人员成功利用表达了绿色荧光蛋白(GFP)的肾脏细胞产生了一种纳秒级的激光脉冲,首次用单个活细胞作为增益介质产生了激光。相关论文将于近日发表在《自然·光子学》杂志上。   产生激光通常要有3个要素,第一是光源,第二是受激产生激光的“增益介质”,第三是将所产生的光聚拢到一

绿色荧光蛋白融合技术在激素类兴奋剂检测中的应用

实验方法原理重组人生长激素(rhGH)与胰岛素生长因子-1(ICF-Ⅰ)是目前运动员滥用严而又难以检测的内源性激素类兴奋剂。以IGF-Ⅰ作为目标分析物,利用分子生物学方法构建绿色荧光蛋白(GFP)与IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前应用广泛的一种生物报告分子,具有稳定、无毒害、无需底物

文献解读|分层组装的DNA线框纳米结构,可用于...(二)

这种DNA八面体的可寻址性和可预见性允许地装载不同数量的单链CA4-FS。作为概念验证,作者构建了半负载CA4-八面体(hCA4-Oct)和全负载CA4-Oct,并测定了负载效率(图1c)。为了进一步验证hCA4-Oct和CA4-Oct的可编程组装,作者接下来分别用Cy3标记的Oct-12H、Cy3

蛋白质组学实验技术大全

每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新,蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多,但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前,先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mR

激光共聚焦显微镜技术的应用

最近需要做成骨细胞培养的实验,师兄给个建议,说是可以做激光共聚焦显微镜 检测。关于这个我还真不知道该如何下手设计这个实验,网上搜集了一些资料,分享给大家,供参考。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM )是20世纪80年代发展起

1068万!广州中医药大学采购这些仪器

  分析测试百科网讯 近日,广州中医药大学科技创新中心、中药学院公布采购项目,项目预算1068万,涉及超高效液相色谱仪(UPLC)、400MHz核磁共振波谱仪、超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用仪、气相色谱质谱联用仪等7台仪器。详情如下:序号采购项目名称采购需求概况预算金额(万元)预计采购时间(填

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验 2

16. 标记反应以后,采用下述公式计算标记率:                                    &

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

我们将方案分成三个阶段: 第一阶段介绍蛋白质的制备及蛋白质的荧光染料标记;第二阶段,通过转染或微注射将适当的探针成分导入细胞;第三阶段,图像的收集和分析过程。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料进行转染的细胞株按第二阶段所介绍的方法制备

荧光素酶和腔肠素Coelenterazine的选择及使用

荧光素酶 自然界中的荧光素酶:是自然界中能够产生荧光的酶的系统,如发光真菌,发光海星,发光鱼,发光节虫,发光甲虫等。 萤火虫荧光素酶:目前常用的萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫(Photinus pyralis),是一个61KDa的单体酶,无需表达后修饰,直接具有完全酶活性,反应需要底物荧光素以及