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银染实验用水指南

SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多,实际应用中,考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,它与蛋白质结合后变为蓝色,结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。银染实验中,在碱性条件下,银离子被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上显色。蛋白电泳后的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶在甲醇溶液中浸泡后,水洗后用硝酸银溶液银染,再水洗后用碳酸钠甲醇水溶液显色。与考染相比,银染具有灵敏度高的优点,很多做环境、植物、育种等方面的客户,都会做银染方面的实验。银染对于试剂的要求比较高,尤其对其中使用纯水的水质要求比较高。上海乐枫(RephiLe)技术人员根据自身经验以及相关文献中的方法为用户提出以下银染实验方案:一、仪器和试剂乙酸(1%),显影液(2.5%碳酸钠和0.02%甲醛水溶液),乙醇(30%),固定液(乙醇:冰醋酸:......阅读全文

银染实验

试剂、试剂盒甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓慢摇动

银染实验

银染实验             试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v) 二硫苏糖醇 AgNO3

银染实验

试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇 AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤 试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓

银染实验用水指南

SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多,实际应用中,考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,它与蛋白质结合后变为蓝色,结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。银染实验中

银染

1.将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2.将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3.去离子水清洗凝胶3次,每次20分钟。4.将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5.用去离子水快速洗胶30秒。6.将定影液中凝胶摇动5~30分钟,时间由所加的蛋白质量决定。7.如果已经达到所需的颜色深度,将凝胶放到定影液中

PCR 产物电泳银染实验

实验方法原理 聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺单体和交联剂亚甲基双丙烯酰胺,在引发剂过硫酸胺(AP)提供自由基和催化剂四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光线诱发聚合,所以其水溶液应贮藏在棕色瓶中,置低温 4℃ 更佳。由于其水溶液稳定性较差,通常 2 个月内用完为好。

PCR 产物电泳银染实验

            实验方法原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺单体和交联剂亚甲基双丙烯酰胺,在引发剂过硫酸胺(AP)提供自由基和催化剂四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光线诱发聚合,所以其水溶液应贮藏在棕色瓶中,置低温 4℃ 更佳。由于其水溶液稳定性

PCR 产物电泳银染实验

常用的核酸电泳法有两种。①水平电泳:琼脂糖凝胶,紫外光下判断条带。此法经济省时,但分辨率较低。②垂直电泳:聚丙烯酰胺凝胶,可见光下判断条带。此法相对费力,但分辨率较高。分辨率高是聚丙烯酰胺电泳法被优先用于克隆性基因重排条带判断的关键。在聚丙烯酰胺凝胶上较宽弥散被判断为假阳性(阴性)的条带,在琼脂糖胶

SSR银染方法

SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗(1)蒸馏水 1-2min(2)0.002% Na2S2O3 1-2min(3)显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛(4)保存0.75%Na2CO3

蛋白质染色实验——银染法

实验材料蛋白质试剂、试剂盒脱色液戊二醛硝酸银洗印显影液仪器、耗材培养箱摇床实验步骤1.  将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2.  倾去固定液,加5倍凝胶体积的脱色液,缓慢摇动60 min 以上。 3.  倾去脱色液,加5倍凝胶体积的10