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反向PCR(reversePCR)原理、程序和局限

反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有两引物外未知序列,从而对未知序进行分析研究. 反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA,也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状 DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现已制备了酵母人工染色体(YAC)大的线状DNA片段的杂交探针,这对......阅读全文

反向PCR(reverse PCR)原理、程序和局限

反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有

REVERSE TRANSCRIPTION PCR:

REVERSE TRANSCRIPTION PCR:RNA -> LOTS OF DNAContentsReverse Transcription ReactionPolymerase Chain ReactionReverse Transcription Reaction:This provide

反向PCR的原理

反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现

反向PCR的原理

反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现

反向pcr的原理

反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现

反向PCR的原理

反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段;现

Reverse Transcriptase-PCR

This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center.The following is a great RT- PCR protocol developed by Ign

Reverse Transcriptase-PCR

This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center.The following is a great RT-PCR protocol developed by Igna

反向PCR

主要内容如下:·         RT-PCR·         Competitive and Quantative RT-PCR·         In Situ RT-PCR·         RL-PCR·         DNA Contamination·         RT-PCR

反向PCR

实验方法原理 标准 PCR 技术应用于定位在两个引物之间(指向内部)的一段 DNA 片段的扩增。与此相反,反向 PCR (inverse PCR) 应用于扩增和克隆与已知 DNA 序列某一个末端相邻的侧翼的未知 DNA 序列,这种未知序列没有引物可以利用。该项技术由几个研究小组开发(Ochm