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酶联免疫吸附(ELISA)实验——双抗体夹心法(测抗原)

酶联免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位。(2)研究抗酶抗体的合成。(3)显现微量的免疫沉淀反应。(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。实验方法原理图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。 这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位,因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用,而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此,不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。我们用在霍乱肠毒素的测定。HbSAg及HbS的测定。实验材料血清血浆体液试剂、试剂盒碳酸盐包被缓冲液抗体球蛋白吐温柠檬酸硫酸仪器、耗材酶标比色计96孔板移液枪离心管离心管盒实验步......阅读全文

酶免疫分析技术进展与自动化

郝繁运   综述 中国误诊学杂志  2007年 第一期  第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编 摘要:本文主要介绍了酶免疫分析的发展现状,从酶免疫分析标记技术若干环节的技术进步、在方法学上与现代化技术的融合与发展、酶免疫分析技

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

抗体的概念动物产生抗体的机理及单克隆抗体的制备方法

  抗体的概念    动物机体受到抗原物质的刺激后, 由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的, 能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白, 这类免疫球蛋白称为抗体(Antibody,简称 Ab)。   免疫球蛋白   免疫球蛋白(Immunogolobulin, 简称Ig) 是指存在于人和动物血液(

从事生物药研发的你,不可不知的ELISA开发方法

ELISA在生物药物研发的各个环节均有广泛的应用:如以生物大分子检测为目的,在药效药代评估时,对动物实验和临床实验中的血液样品的药物浓度和生物大分子标志物进行定量检测;以亲和力测定为目的,在质量分析过程中,对抗体相对于靶点抗原的亲和力检测; 以亲和力筛选为目的,在抗体发现过程中,对杂交瘤细

抗体的概念、动物产生抗体的机理及单克隆抗体...(三)

单克隆抗体杂交瘤技术基本流程单克隆抗体的制备步骤1、免疫原的制备;2、免疫动物 ;选择体重18-20g BALB/C 雌性小鼠用于免疫。50-100ug抗原/只与等体积福氏完全佐剂混合,充分乳化后,经背腹部皮下多点注射及腹腔注射相结合的方式免疫,总的免疫体积0.2-0.3ml每只;间隔3周,取与

食品安全快速检测技术你知多少?

快速检测技术广泛用于食品安全快速检测,临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。    1、食品安全问题主要有害污染物    (1)农药,化肥:有机磷,有机氯,硝酸盐 

ELISA开发方法

一、前言ELISA在生物药物研发的各个环节均有广泛的应用:如以生物大分子检测为目的,在药效药代评估时,对动物实验和临床实验中的血液样品的药物浓度和生物大分子标志物进行定量检测;以亲和力测定为目的,在质量分析过程中,对抗体相对于靶点抗原的亲和力检测;以亲和力筛选为目的,在抗体发现过程中,对杂交瘤细胞克

ELISA原理与分类

一、ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

ELISA检测方法有哪些?

酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合,然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么,它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗?

食品安全快速检测技术大汇总(一)

快速检测技术广泛用于食品安全快速检测,临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。 1、食品安全问题主要有害污染物: (1)农药,化肥:有机磷,有机氯,硝酸盐 (2)兽药:兴奋剂,镇静剂,抗生素 (3)

两种测定抗体效价方法的实验原理和操作步骤

酶联免疫吸附实验法一、实验目的1. 深入了解ELISA法测定抗体效价的原理。2. 掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上,形成酶

江苏大学 检验医学专业实验-临床免疫学检验

  抗血清的制备  【原理】:用抗原刺激机体可以产生抗体,抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原,经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。  【注意事项】  ①制备佐剂时,一定要顺着同一方向用劲磨。  ②检查油包水的方法:培养皿内加水,滴入混匀液

ELISA技术测定单克隆抗体效价方法

一、实验目的1.深入了解elisa 法测定抗体效价的原理。2.掌握ELISA 法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA 是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上,形成

ELISA的试剂-2

3.1.3  包被用抗原   用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中

ELISA中的试剂(1)-免疫吸附剂

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述,ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)

酶联免疫吸附法检测瘦肉精

  摘要:介绍了竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法。利用盐酸克伦特罗试剂盒,对猪肉组织中残留的盐酸克伦特罗经抽提、竞争后,用酶标仪进行检测分析。此法较适用于现场检验,检测速度快、灵敏度高,是保证肉品卫生安全的较好监控方法。   酶联免疫吸附法是目前最佳的检测方法。ELISA 检测

ELISA检测结果准确可靠的必要条件全方位分析

1.  标本的采取和保存    可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血

如何挑选择适合自己实验的ELISA试剂盒?

elisa试剂盒在实验室已经相当普及,绝大多数ELISA试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。用试剂盒当然比自己慢慢摸条件快得多,ELISA试剂盒不仅可以让实验更便利,往往还更加。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口,数量繁多令人目不暇接,怎样才能选出zui适用的产品呢?一起来听听上海恒远

酶联免疫吸附法检测瘦肉精

酶联免疫吸附法是目前最佳的检测方法。ELISA 检测方法有双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等。该文是利用酶联免疫吸附法中的竞争法测抗体,其原理是利用多克隆抗体既能与盐酸克伦特罗结合,也能与包被抗原结合。这些包被抗原被固定在酶标板孔壁上,当样品中含有瘦肉精时,它与包被抗原竞争结

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4

 (二)细胞融合  1.细胞融合前准备  (1)骨髓瘤细胞系的选择:骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系,这样杂交融合率高,也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag

实验室HIV检测技术概述及进展

艾滋病(AIDS)又称获得性免疫缺陷综合征,是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。HIV感染的诊断是艾滋病预防控制 工作的重要组成部分,建立敏感实用的检测方法对于监测、诊断或血液筛查,控制艾滋病的流行显得尤为重要。以下本文就HIV的检测技术现状及进展做一综述。1 

ELISA技术测定单克隆抗体效价方法

一、实验目的1.深入了解elisa 法测定抗体效价的原理。2.掌握ELISA 法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA 是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原

酶联免疫吸附(ELISA)实验

酶联免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位。(2)研究抗酶抗体的合成。(3)显现微量的免疫沉淀反应。(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。实验方法双抗体夹心法(测抗原)间接法(测抗体)竞争法测抗原实验方法原理图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)-1

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是一种以荧光物作为标记物的免疫分析技术,荧光物质分子在特定条件下吸收激发光的能量后,分子呈激发态而极不稳定,其迅速回到基态时,可以电磁辐射形式释放出所有的光能,发射出波长较照射光长的荧光。用荧光素与已知的抗体(或抗原,较少用

ELISA

实验概要ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。实验原理ELISA是以

ELISA技术

 ELISAELISA是酶联接免疫吸附剂测定 Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay 的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。   

ELISA的概念、原理、操作步骤

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。(一) 原理ELISA是以免疫学反应为

ELISA的概念、原理、操作步骤

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域

侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

    1、侧流免疫层析检测技术    侧流免疫层析检测技术(LFIA) 也称横向流动免疫检测技术,是出现于20世纪60年代初期的一种独特的免疫分析方式,以条状纤维层析材料为固相,借助毛细管的吸附作用使样品在层析材料上移动,其中样品