细胞介导细胞毒作用检测法4：时间分辩荧光分析法
时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分钟，其间摇晃数次。3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液终止反应5分钟。4．用含2mmol/L CaCl2的RPMI-1640培养液洗涤细胞5次。用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成5×104/ml。 检测方法1．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞悬液，每孔加100μl。2．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：1～20：1。自然释放孔不加效应细胞只加100μl培养液，最大释放孔中加100μl 0.5％ Triton......阅读全文
细胞介导细胞毒作用检测法4：时间分辩荧光分析法
时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/
细胞介导细胞毒作用检测法：时间分辩荧光分析法
1）铕荧光检测法：标记靶细胞：1、EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2、用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖
细胞介导细胞毒作用检测法6：荧光法检测CMC
荧光法检测CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加
细胞介导细胞毒作用检测法3：LDH释放法
LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与
细胞介导细胞毒作用检测法1：Cr释放法
4小时51Cr释放法检测CMC活性1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。2．如上用RPM
细胞介导细胞毒作用检测法7：单细胞CMC试验
单细胞CMC试验1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：细胞的制备
CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶...
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶细胞的制备CMC中效应细胞的制备：1）用淋巴细胞分离液分离PBMC：1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离
细胞介导细胞毒作用检测法5：用MTT检测法测定CMC
用MTT检测法测定CMC 1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在625px2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。 2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细
细胞介导细胞毒作用检测法2：[3H]脱氧胸苷释放法
[3H]脱氧胸苷释放法1）标记靶细胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）[3H]TdR加到1ml靶细胞中，37℃水浴标记4～6小时，每30分钟摇晃一次。2．用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用含5％小