聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度
一）原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中，电泳凝胶分为两层：上层胶为低浓度的大孔胶，称为浓缩胶或成层胶，配制此层胶的缓冲液是Tris-HCl，pH6.7；下层胶则是高浓度的小孔胶，称为分离胶或电泳胶，成胶的缓冲液是Tris-HCl，pH8.9。电泳槽中的电极缓冲液则是Tris-甘氨酸，pH8.3。可见，凝胶浓度、成胶成分、pH与电泳液缓冲系统各不相同，形成了一个不连续系统。电泳时，蛋白质样品放置在浓缩胶上，为防止蛋白质样品在电极缓冲液中扩散，因而加入等体积的40%蔗糖或50%甘油与之混合，以提高密度；为观察蛋白质样品泳动的情况，样品中还......阅读全文
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度
一）原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度-2
④ 浓缩胶缓冲液：称取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,调pH6.7，用重蒸水定容至100ml，置棕色瓶内，4℃贮存。⑤ 浓缩胶贮液：称Acr10g，Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml，过滤后置棕色瓶内，4℃贮存。⑥ 40%
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度-1
（一）原 理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度-3
4．加样作为分析用的PAGE加样量仅需几微克，2-3ul血清电泳后就能分出几十条蛋白区带。为防止样品扩散，应在样品中加入等体积40%蔗糖（内含少许溴酚兰）。用微量注射器取5ul上述混合液，通过缓冲液，小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部，待所有凹形样品槽内都加了样品，即可开始电泳。5．电泳将直流稳压电
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度
由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成「连续系统」和「不连续系统」两种电泳系统。「不连续系统」最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及 pH 不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH 也不相同
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度
（一）原理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度-2
③ 分析纯过硫酸胺（AP）（AR） 0.14g加重蒸水至100ml，置棕色瓶，4℃储存仅能用一周，最好当天配制。上述3种试剂用于制备分离胶。 ④ 浓缩胶缓冲液：称取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,调pH6.7，用重蒸水定容至100
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度（二）
（三）操作方法1．安装夹心式垂直板电泳槽夹心式垂直板电泳槽操作简单，不易渗漏。这种电泳槽两侧为有机玻璃制成的电极槽，两个电极槽中间夹有一个凝胶模，该模由一个上框形凝胶框、长与短玻璃板及样品槽模板（梳子）所组成。电泳槽由上储槽（白金电极在上或面对短玻璃板），下储槽（白金电极在下或面对长玻璃板）和回纹状
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度-3
3．制备凝胶板不连续体系采用不同孔径及pH的分离胶与浓缩胶 ，凝胶制备应分2步进行。① 分离胶的制备：根据实验要求，选择最终丙烯酰胺的浓度，本实验需20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液，其加胶方式不同于连续系统。混合后的凝胶溶液，用细长头的滴管加至长、短玻璃板间的窄缝内，加胶高度距样品模板
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度（一）
（一）原 理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也