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噬菌体抗体库技术知识点

将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体,转染工程细菌进行表达,然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体,在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。(一)基本原理和程序构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程:1.构建噬菌体载体;2.表达载体转化细菌,构建全套抗体库;3.从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞,提取mRNA并反转录为cDNA;4.应用抗体轻链和重链引物,根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段。(二)噬菌体抗体库技术的特点1.模拟天然全套抗体库;2.可获得高亲合力的人源化抗体;3.避免使用人工免疫和杂交瘤技术。......阅读全文

噬菌体抗体库技术知识点

将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体,转染工程细菌进行表达,然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体,在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。(一)基本原理和程序构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程:1.构建噬菌体载体;2.表达载体转化细

噬菌体抗体库的富集筛选

实验概要用于噬菌体抗体库富集筛选的抗原至关重要,一般来说,纯化后的可溶性蛋白纯度高,含量大,可直接包被ELISA板,是筛选特异性抗体的最佳选择。在某种情况下,需要获得针对某一特殊蛋白的单克隆抗体,也可以用抗这种蛋白的单克隆抗体捕捉抗原的方法来进行筛选。实验步骤1. 将用于筛选特异性抗体的抗原用0.1

噬菌体抗体库的菌落筛选法

实验概要本实验介绍了噬菌体抗体库的菌落筛选操作流程。实验步骤1. 将每轮筛选洗脱的噬菌体用来感染新鲜的XLIBlu菌,以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨苄青霉素平皿,37℃ 4~5h。2. 事先将硝酸纤维素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min,在超净台中晾干后,铺在上述涂有细菌的

噬菌体抗体库技术基本原理是什么?

  构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程:  1.从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞,提取mRNA并反转录为cDNA;  2.应用抗体轻链和重链引物,根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段;  3.构建噬菌体载体;  4.表达载体转化细菌,构建全套抗体库。

新冠病毒核酸检测PCR技术知识点梳理(一)

近日,由于全国复工复产复学的大量需求,阿里健康、美团App 等线上平台联合各大第三方检测机构,陆续开放了线上预约新冠病毒核酸检测服务。 开通服务的地区,人们可以拿起手机即可便捷的预约核酸检测,最快24小时即可拿到结果。如此便捷的服务,让广大民众欢欣鼓舞,科技的发展又一次为人们的生活带来翻天

新冠病毒核酸检测PCR技术知识点梳理(二)

定量PCR,也就是qPCR,由于其英文全称是real-time quantitative polymerase chain reaction,有些也称为RT-qPCR,国外通常简称为qPCR,是由美国Applied Bisystems公司于1996年研制出的一种新型核酸定量技术,并随着荧光P

噬菌体抗体库技术的基本原理和程序

将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体,转染工程细菌进行表达,然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体,在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。基本原理和程序:构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程:1.从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴

人源化抗体知识点

主要目的是减少抗体的异源性,以利于临床应用。(一)嵌合抗体 从杂交瘤细胞中分离出功能性可变区基因,与人Ig恒定区的基因连接,构建鼠-人嵌合质粒载体,转染宿主细胞,表达鼠-人嵌合抗体。(二)改形抗体 将人抗体可变区中互补决定簇(CDR)序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源

噬菌体抗体ELISA

实验概要噬菌体ELISA是一种快速而便捷的方法,尤其是因为pⅧ有多拷贝会导致信号的扩增。主要试剂1. 2%MPBS2. PBS/Tween3. 辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗噬菌体单克隆抗体(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)

噬菌体抗体ELISA

噬菌体抗体ELISA 噬菌体ELISA快速而便捷,尤其是因为pⅧ有多拷贝会导致信号的扩增。不过,后续的抗体检测总是要以其可溶性形式进行。 [器材和试剂] ● 96孔ELISA板,例如Nunc maxisorb442404(可自VWR购得) ● 2%M ● /Tw