Antpedia LOGO WIKI资讯

真核表达文库的构建与筛选实验

实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤 阶段一:在真核表达载体上构建 cDNA 文库材料缓冲液与溶液10X 限制性内切核酸酶缓冲液酶及缓冲液限制性内切核酸酶见步骤 3核酸与寡核苷酸通过 poly(A)+富集的 mRNAmRNA 须提取自表达目标蛋自活性的细胞或组织,并经两轮 oligo(dT)-纤维素亲和层析纯化(见第 7 章,方案 3)。鉴定目标蛋白高表达组织或细胞系的方法应与表达克隆中的筛选方法相同。获知目标 mRNA 的大小对于表达克隆非常有益,可对 mRNA 进行分级分离,然后检测不同大小组分的翻译产物中靶标蛋白生物学活性以确定这一交分级分离的 mRM......阅读全文

Morris水迷宫、跳台实验对痴呆小鼠学习记忆能力减退的改..

Morris水迷宫、跳台实验对痴呆小鼠学习记忆能力减退的改善作用摘 要 目的: 对芎归汤有效组分抗东莨菪碱致痴呆小鼠学习记忆能力减退的改善作用进行药效评价,并确定芎归汤有效组分对抗痴呆模型改善学习记忆药理学效应的" 量-效" 关系和 ED50,为进一步开展药效评价提供剂量

芎归汤有效组分抗东莨菪碱致痴呆模型学习记忆能力...二

1.5 方法 将水迷宫和跳台筛选训练合格的小鼠 80 只,雌雄各半,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、芎归汤有效组分剂量 1 ~ 5 组及阳性药组。芎归汤有效组分剂量 1 ~ 5 组及阳性药组分别给予各自治疗药物,按照 25ml/kg 体积每天灌胃,空白对照子给予相同体积生理盐水,连续给

药物高通量筛选技术的研究

  药物高通量筛选技术,是发现创新药物的重要技术手段之一,已受到药学同行的极大关注。现将近年来药物高通量筛选技术的研究进展做一综述。   ■发展中的高通量筛选技术   高通量筛选的组合模式。近年来,由于自动化技术特别是机器人的应用,在新药研究中出现了高通量筛选技术,该技术将化学、基

高通量筛选技术简要综述

  药物高通量筛选(HTS)技术,是发现创新药物的重要技术手段之一,已受到药学同行的极大关注。现将近年来药物高通量筛选技术的研究进展做一综述。  发展中的高通量筛选技术  高通量筛选的组合模式近年来,由于自动化技术特别是机器人的应用,在新药研究中出现了高通量筛选技术,该技术将化学、基因组研究、生物信

药物高通量筛选技术的研究进展

  药物高通量筛选技术,是发现创新药物的重要技术手段之一,已受到药学同行的极大关注。现将近年来药物高通量筛选技术的研究进展做一综述。   ■发展中的高通量筛选技术   高通量筛选的组合模式。近年来,由于自动化技术特别是机器人的应用,在新药研究中出现了高通量筛选技术,该技术将化学、

药物高通量筛选技术的研究进展

药物高通量筛选技术,是发现创新药物的重要技术手段之一,已受到药学同行的极大关注。现将近年来药物高通量筛选技术的研究进展做一综述。■发展中的高通量筛选技术高通量筛选的组合模式。近年来,由于自动化技术特别是机器人的应用,在新药研究中出现了高通量筛选技术,该技术将化学、基因组研究、生物信息,以及自动化仪器

单克隆抗体的制备(三)

3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°C无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得

重组质粒的筛选(抗生素平板筛选和α互补筛选)

重组DNA转化受体细胞后,须在不同水平上进行筛选,以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中,并非每个受体细胞都被转化;即使获得转化细胞,也并非都含有目的基因,所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR

利用MiniMax成像系统评估化合物对Hela-GFP细胞增殖和形态...

利用MiniMax成像系统评估化合物对Hela-GFP细胞增殖和形态学的影响20世纪以来,环境问题越来越受到社会的关注,成千上万的化学物质被研究并报道。这些化合物被释放到环境中,将有可能导致对野生动物和人类的长期的、不利的影响。近日,华中农业大学研究人员在《Environmental Science

方群:在微流控领域掌握自主知识产权

  研究工作2:高通量进样和分析筛选  方教授研究组的另一个方向,是做高通量低消耗的分析和筛选,这对于大规模筛选领域非常有意义。在许多筛选领域(如药物筛选),样品量很少,一些生化试剂也非常贵,减少耗样量、提高通量将大大降低筛选成本。比如现在的生物学研究很多依赖于筛选实验,筛选规模量级是上千

对蛋白质结晶原理技术的研究

      我们在人类的基因组织中,排列的顺序都是比较整齐的,这个领域中的一些科学家已经将很多的研究转移到了基因上,尤其是在分子遗传学上。我们对分子的蛋白质检测已经成为很多领域的科学家们研究的主要对象了,专家们在不断的研究中发现蛋白质测定仪正是适合农

肿瘤动物模型建立实验

一、肿瘤动物模型建立的意义: (1)评价抗肿瘤免疫治疗的疗效; (2)作为抗肿瘤药物筛选模型; (3)为肿瘤转移研究提供更好的研究平台; (4)为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。 二、诱发性肿瘤动物模型 实验方法原理:诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病

快速筛选量热仪的主要优点

快速筛选量热仪能迅速进行多样品的量热筛选,在更深入的实验前,对样品进行快速筛选;同时它也是一台 入门级的危害判断量热仪。还可以通过减少样品数量,降低实验速度可获高精度数据。快速筛选量热仪主要优点: 1、它能迅速进行多样品的量热筛选。在更深入的实验前,对样品进行快速筛选;同时它也是一台入门级

微流控芯片单细胞克隆形成抑制乳腺癌干细胞药物筛选

大量研究结果提示,肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤发生、发展、转移的决定因素,也是导致治疗失败的主要原因。传统肿瘤治疗手段如放疗和化疗,并不能彻底清除肿瘤干细胞而且会对正常组织造成损害。鉴于上述事实,针对肿瘤干细胞的靶向清除方法已成为近期肿瘤治疗的一种新策略。肿瘤干细

国内外大型药企追捧斑马鱼新药筛选平台

  可别小看这几厘米长的小不点,斑马鱼基因与人类基因同源性高达85%,信号传导通路基本相似。这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体。“比如癫痫、关节炎、脂肪肝、癌症等常见人类疾病模型,都可以通过斑马鱼进行新药筛选。”据环特生物科技有限公司负责人介绍,目前斑马鱼可以承

泌尿系统药理实验中的选择与应用(一)

泌尿系统药理实验中的选择与应用(一)利尿药及肾功能测定实验中动物的选择应用1.利尿药及抗利尿药筛选实验:要判断所试药物是否有利尿作用,可选用大白鼠、小白鼠、猫或狗进行实验,其中以大白鼠较为常用。对人体有利尿作用的药物均可在大白鼠实验中获得较好的利尿效果,但汞撒利的作用较差。因此筛选利尿药实验的首选动

人类疾病动物模型-1

一、复制方法和应用动物疾病模型的复制,是用人为的方法,使动物在一定的致病因素(物理的、化学的、生物的)作用下,造成动物组织、器官或全身一定损害,出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病,通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律,为研究人类疾病的预防、治疗(包括新药物试用)提供

ChIP 新手心得

最近有不少战友在做ChIP实验,希望我的一点经验对大家有帮助(本贴不谈实验步骤,最后我会附件一份说明书,有详细步骤,另外建议像我一样的新手用试剂盒,避免不必要的麻烦)一、原理转录从基因的启动子区开始,由一系列的转录因子结合到基因的启动子区,通用转录因子结合在基本启动子区起始转录,而这个过程对基因的转

知识分享:稳转株的制备

  实验原理:   利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种:瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染,外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少,能够满足小量蛋白制备,大量生产成本很高。相对于此,稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,随着细胞的生长分裂外源基因

泌尿系统药理实验中的选择与应用

泌尿系统药理实验中的选择与应用  (一)利尿药及肾功能测定实验中动物的选择应用  1.利尿药及抗利尿药筛选实验:要判断所试药物是否有利尿作用,可选用大白鼠、小白鼠、猫或狗进行实验,其中以大白鼠较为常用。对人体有利尿作用的药物均可在大白鼠实验中获得较好的利尿效果,但汞撒利的作用较差。因此筛选利尿药实验

毛细驱动微流控芯片研发及其生物医学应用

微流控芯片技术是将生物、化学实验室的基本功能集成到一个微小的芯片上的技术,近三十年来取得了迅猛的发展,已被广泛的应用在环境监测、食品检测、生化分析、制药工程等领域。相对于传统以石英、玻璃为材料的微流控芯片,以纸作为基底材料的微流控芯片具有更好的生物兼容性、更低的成本,无需外置的泵、阀等优点,这使其在

看MRC的科学家如何快速、直接进行大分子结晶条件优化

简介 X-ray晶体学方法是目前获得生物大分子结构的最有效手段。但是想要从纯化的蛋白、核酸或是大分子复合物获得晶体需要面临巨大的挑战。与繁复冗长的实验设置和过程相伴的往往是极低的实验成功率。首先,研究者会用购买商品化的试剂盒,在一个广泛的范围内对纯化的样品进行一轮结晶条件的初步筛选。然后,再根据具体

稳转株的制备

实验原理:利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种:瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染,外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少,能够满足小量蛋白制备,大量生产成本很高。相对于此,稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染

非接触式纳升级声波移液平台—ATS的应用案例

ATS诞生于专注技术研发,低调的美国公司EDC,并很快地被GSK,Novartis,Merck, Pfizer 等公司采用。Broad Institute和美国伯克利国家重点实验室也在文章中标注采用ATS进行基于定量PCR 的高通量药物筛选和高通量质谱分析实验。ATS到底是怎样一个技术? 

恒温摇床的实验数据分析处理

  恒温摇床:恒温摇床是一种常用的实验室设备,属于实验室仪器,广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀,微生物、细菌和细胞培养。1、方便快捷的追溯实验过程,优选实验方法,优化实验条件,极方便、快捷地追溯实验过程,完成实验

恒温摇床的实验处理

 恒温摇床:恒温摇床是一种常用的实验室设备,属于实验室仪器,广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀,微生物、细菌和细胞培养。1、方便快捷的追溯实验过程,优选实验方法,优化实验条件,极方便、快捷地追溯实验过程,完成实验报

上海恒温摇床的实验数据分析处理

上海恒温摇床的实验数据分析处理   生产的恒温摇床:恒温摇床是一种常用的实验室设备,属于实验室仪器,广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀,微生物、细菌和细胞培养。1、方便快捷的追溯实验过程,优选实验方法,优

动物实验的基本操作技术

动物实验的基本操作技术实验动物(experimental animals)是指经过人工饲养、繁育,对其携带的微生物及寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,应用于科研、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。这些个体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。 一、常用实验

设计实验课题三大依据

众所周知,科研工作者在进行科学研究之前,需要制定完善的统计研究设计方案,那么什么样的设计方案才称得上是完善的呢?现在劲马为您分享实验项目的三大依据要素:  要素一:实验因素所有影响实验结果的条件都称为影响因素,实验研究的目的不同,对实验的要求也不同。影响因素有客观与主观,主要与次要因素之分

ATS声波移液原理及应用案例(一)

ATS诞生于专注技术研发,低调的美国公司EDC,并很快地被GSK,Novartis,Merck,Pfizer 等公司采用。Broad Institute和美国伯克利国家重点实验室也在文章中标注采用ATS进行基于定量PCR 的高通量药物筛选和高通量质谱分析实验。 ATS到底是怎样一个技术?&nbs