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植物基因组提取(CATB法)

一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液......阅读全文

植物基因组提取(CATB法)

一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗

SDS法提取植物基因组DNA

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-H

利用CTAB法提取植物基因组DNA

一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分

使用离心机提取植物基因组DNA

植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。(这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的,可以一机配多种

磁珠法提取基因组DNA的原理

(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生

植物基因组DNA及总RNA提取技术-2

(二)植物总RNA提取 (1)65°C水浴中预热15 mL CTAB提取液。 (2)液氮中研磨2~3 g新鲜或-70°C冷冻的材料。 (3)转移样品至有CTAB提取液的离心管中,立即激烈涡旋30s,短时放回 65°C水浴中(4~5 min)。 (4)加入等体积

植物基因组DNA及总RNA提取技术-1

幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段,核较大而胞质较少,核酸浓度高,且内含物少、次生代谢产物少,蛋白质及多糖类物质相对较少,在SDS或 CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂并释放出内含物,提取的DNA、RNA的产量高,纯度好。 提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活DN

如何使用离心机提取植物基因组DNA

就那植物来说吧!原理是一致的.方法不同. 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl,pH8

植物基因组提取试剂盒使用说明

试剂盒内容及保存: 试剂盒组成 RTG2404-01(50次) 贮存方式 缓冲液AP1 25 ml 室温 缓冲液AP2 10 ml 室温 缓冲液AP3(浓缩液

如何使用离心机提取植物基因组DNA

   如何使用离心机提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料www.runwelltac.com 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,