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抗血清的制备(二)

3、免疫途径,剂量和免疫周期 抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求,选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2~4周。常规免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫;再以免疫原加IFA作2~5次加强免疫,每次间隔2~3周,皮下或腹腔注射加强免疫。 1)常规(皮内多点注射)免疫: 1第一次免疫:剂量为每只兔子注射1.0 ml抗原乳剂(含抗原量1~2mg)。注射部位为两只后脚掌的皮内各注射0.2 ml,其余0.6 ml分多点注入脊柱二侧,颈部,腹股沟和腋窝等处淋巴结附近部位皮内,每点可注入0.05ml,分12点注入。 2第二次免疫:初次免疫后20天左右,剂量为1.0ml/只(1~2 mg/ml),加福氏不完全佐剂。注射部位在腹部皮......阅读全文

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术3

抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备  有了质量好的抗原,还必须选择适当的免疫途径,才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。  (一)用于免疫的动物  作免疫用的动物有哺乳类和禽类,主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所

抗体的制备方法与原理

一、抗血清的制备  有了质量好的抗原,还必须选择适当的免疫途径,才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。  (一)用于免疫的动物  作免疫用的动物有哺乳类和禽类,主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量,如

狂蛇风险堪忧:抗蛇毒血清短缺问题难解决

   午夜刚过,Abdulsalam Nasidi的电话就响了,打电话的正是尼日利亚卫生部部长。Nasidi曾在尼日利亚卫生部工作,电话那头希望他能赶紧去贝努埃河谷,为许多奄奄一息的患者进行诊治。那里忽然出现了很多病人,他们眼、口、鼻出血。听到这些症状,Nasidi的脑海里涌现出的是埃博拉、拉沙热、

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

抗伤寒沙门菌SOD血清的制备及其免疫保护作用的研究

作者:徐军发,唐湘涓        单位:广东医学院检验科关键词:伤寒沙门菌;鼠伤寒沙门菌;Fe-SOD;抗血清;免疫保护作用【 摘要 】 目的 制备抗伤寒沙门菌Fe-SOD血清,研究其免疫保护作用,探讨SOD与沙门菌毒力的关系。

独特型和抗独特型(一)

  一、独特型发现  本世纪中叶,人们发现将Ig注入同种或异种动物体内可诱导产生抗Ig的抗血清。随后发现了在Ig分子上有两类抗原决定簇,即同种型(isotype)和同种异型(allotype)。1955年Slater等在研究兔抗人骨髓瘤蛋白抗血清的特异性时,发现抗某一些骨髓瘤蛋白抗血清用无

APOA APOB测定实验

实验方法原理火箭免疫电泳法是单向免疫扩散法的一种改进,通过应用直流电(稳压稳流)使抗(APOA1和B)在含有特异性抗体的琼脂糖凝胶中扩散,PH8.6时抗原向阳极移动,在泳动图中与凝胶中的抗体反应,逐渐形成类似火箭的沉淀锋,其锋高(或锋面积)与抗原浓度成正比,故可作抗原定量。实验步骤一、 实验器材:l

APOA APOB测定实验

实验方法原理 火箭免疫电泳法是单向免疫扩散法的一种改进,通过应用直流电(稳压稳流)使抗(APOA1和B)在含有特异性抗体的琼脂糖凝胶中扩散,PH8.6时抗原向阳极移动,在泳动图中与凝胶中的抗体反应,逐渐形成类似火箭的沉淀锋,其锋高(或锋面积)与抗原浓度成正比,故可作抗原定量。实验步骤 一、 实验器材

三种方法检测孕妇血清IgG抗A(B)效价的结果比较

用经典法/改良法和微柱凝胶法检测孕妇血清IgG抗A(B)效价的结果比较:作者:张庆侠,郝建华,倪琳婷,程琼,周天祥作者单位:深圳市第六人民医院,广东 深圳 518052【摘要】  目的:比较经典法、改良法和微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇血清中IgG抗A(B)效价的差异。方法:用经典法、改

ABO血型详述

    ABO血型物质(凝集原)除存在于红细胞膜上外,还出现于唾液、胃液、精液等分泌液中。血型物质的化学本质是指构成血型抗原的糖蛋白或糖脂,而血型的特异性主要取决于血型抗原糖链的组成(即血型抗原的决定簇在糖链上),称之为凝集原。ABO的起源及发现    血液有

免疫电镜胶体金标记法操作大全

金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫

三种方法检测孕妇血清IgG抗A(B)效价的结果比较

作者:张庆侠,郝建华,倪琳婷,程琼,周天祥作者单位:深圳市第六人民医院,广东 深圳 518052【摘要】  目的:比较经典法、改良法和微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇血清中IgG抗A(B)效价的差异。方法:用经典法、改良法和微柱凝胶法分别检测136例孕妇血清中IgG抗A(B)效价 ,计算其

人环磷酸鸟苷酶联免疫试剂盒使用说明(二)

特异性试剂的制备cGMP  AChE示踪液100dtn cGMP  AChE示踪液与6ml的缓冲液或500 dtn cGMP  AChE示踪液与30ml的缓冲液配制的cGMP示踪液应储存在4℃下,4周内有效示踪染料:加入染料可辅助目测观察,在配制好的示踪液中加入染料(6

人CGMP ELISA Kit使用说明(二)

特异性试剂的制备cGMP  AChE示踪液100dtn cGMP  AChE示踪液与6ml的缓冲液或500 dtn cGMP  AChE示踪液与30ml的缓冲液配制的cGMP示踪液应储存在4℃下,4周内有效示踪染料:加入染料可辅助目测观察,在配制好的示踪液中加入染料(6

免疫电镜胶体金标记法-2

(4)胶体金与蛋白A的结合和纯化,依上法测得所需的比例超过10%,即每30ml胶体中加入2mg蛋白A,5min后,加入0.3ml PEG作为稳定剂,然后以15000r/min离心45min(不同方法制备的金离心速度不同),略带红色的松散的复合物沉淀即为PAg复合物。小心弃去上清液,加入PBS冲洗

植物病毒检疫技术突破填补国内空白

经过半年多的努力,中山检验检疫局技术中心分子生物学实验室27日传出喜讯,该实验室已经制备出我国最新颁布的检疫性植物病毒李痘病毒、李属坏死环斑病毒和侵染香蕉最为严重的病毒之一黄瓜花叶病毒的抗血清,价值超亿元,该项技术填补了广东检验检疫系统在全国植物病毒方面无自制抗血清的空白。 据《南方都市报》报道,

HLA抗原的检测(一)

  (一)HLA-A、B、C抗原的检测  HLA-A、B、C抗原可用血清学方法鉴定,故又称SD抗原(serologically defined antigen),常采用微量淋巴细胞毒性试验(microlymphocytotoxicity test),又称补体依赖细胞毒试验(comp

DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学

一、DNA探针的应用  虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。  在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA变性,解离成单链,迅置于冰上冷却。然

抗血清制备法-生化检验

抗血清制备法:抗血清指含有抗体的血清。传统的抗血清制备方法是将某种抗原通过多次注入动物,数十天后或数月后,采集动物血,立即分离出血清。此抗血清在保存或应用前必须作效价和特异性鉴定及纯化。(一)免疫动物的选择免疫动物的选择基本要求:1.抗原与免疫动物的种属差异越远越好。2.动物必须适龄、健壮、无感染、

抗人球蛋白-间接抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验-间接抗人球蛋白试验:原理:抗人球蛋白试验(antiglobulintest,AGT),又称Coombs试验,是检查不完全抗体的一种很好方法。用人血清免疫家兔,产生抗人球蛋白抗体,即抗人球蛋白血清。将抗人球蛋白血清(AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中,红细胞表面的抗体球蛋白(即使其

连日洪灾致蛇伤病人猛增 长沙抗蛇毒血清告急

  连日来,长沙市内医院频繁接诊被蛇咬伤患者,部分医院库存的抗蛇毒血清告急。据了解,受全国多个地区进入汛期或发生水灾的影响,被蛇咬伤的患者猛增,而目前国内仅一家公司生产抗蛇毒血清,导致抗蛇毒血清的供应紧缺。  抗蛇毒血清最近紧缺  目前,天气日趋炎热,蛇类在田间和草丛中

沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)

可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵敏。一、环状沉淀

江苏大学 检验医学专业实验-临床免疫学检验

  抗血清的制备  【原理】:用抗原刺激机体可以产生抗体,抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原,经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。  【注意事项】  ①制备佐剂时,一定要顺着同一方向用劲磨。  ②检查油包水的方法:培养皿内加水,滴入混匀液

合成生物学解决全球抗蛇毒血清短缺

  当医疗慈善机构无国界医生在去年9月称全球正面临抗蛇毒血清短缺的公共卫生危机时,巴西生物化学家Paulo Lee Ho并未感到惊讶。他的整个职业生涯都是在圣保罗的布坦坦研究所寻找制造抗蛇毒血清的更佳途径,从而治疗银环蛇的咬伤。  传统方法依赖于天然银环蛇毒液,但这是很难获得的:蛇的每一咬只产生少量

琼脂扩散试验(gel diffusion test)

可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散,二者相遇,在比例合适处形成白色沉淀。基本类型有单向扩散和双向扩散两种。 (一)双向琼脂扩散试验(Double immunodiffusion test) 抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中,两者各自向四周扩散,如两者

正粘病毒分离和鉴定

正粘病毒诊断 根据流感的典型临床症状及其高度的接触传染性、急性发作和迅速传播等特点,常可作出初步诊断。但为了弄清是由哪一型或哪一亚型病毒引起的,则必须进行实验诊断,即必须进行病毒分离和鉴定或作血清学检查,才能获得确诊,尤其是在首次发现疫情的地区。 (1)病毒的分离和鉴定&n

抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检测的应用进展

类风湿关节炎(rheumataid arthritis,RA)是一种以慢性关节炎为特征的系统性自身免疫性疾病,该病如不及时诊断治疗,即可出现软骨和骨的侵蚀性病变,造成关节结构破坏,最终发展成为关节畸形、强直,导致不同程度的残疾,因此早期诊断至关重要。但是,目前的诊断均依据1987年美国风湿协会修订的

超敏反应的主要免疫学检测

四种类型超敏反应发生的机制不同,同一抗原也可在不同条件下引起不同类型的超敏反应。四种类型超敏反应的免疫检测方法有所不同。Ⅰ型超敏反应主要检测过敏原和测定血清特异性IgE.Ⅱ型超敏反应的检测重点是抗血细胞抗体。Ⅲ型超敏反应主要检测循环免疫复合物。Ⅳ型超敏反应可用皮肤试验来检测。  一、过敏原皮肤试验 

血清丙型肝炎病毒感染指标及序列变异的动态研究

  摘要 目的:探讨动态观测HCV感染指标及序列变异的意义。方法:ELISA方法检测抗-HCV-IgG、IgM,RT-PCR方法检测HCV rNA, PCR产物直接测序。结果:6例感染HCV的血透析患者抗-HCV-IgG的表现类型分为持续阴性及持续阳性两种;抗-HCV-IgM有四种表现:一

抗球蛋白实验(直接Coombs实验和间接Coombs实验)

机体受某些抗原刺激后,可产生不完全抗体,由于这种抗体体积较小、长度短,只能与颗粒抗原一方相结合(又称单价抗体),因而不能出现肉眼可见的凝集反应。Coombs首先根据抗体存在于球蛋白,注入异种动物的球蛋白又是抗原的原理,将含有不完全抗体的血清球蛋白免疫异种动物,获得抗球蛋白抗体,此种抗体可以起到桥梁作