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Nature子刊:TALEN/CRISPR介导的新型替代基因敲入技术

来自广岛大学的专任讲师Tetsushi Sakuma、Takashi Yamamoto教授,专任副教授Ken-Ichi T Suzuki及同事们在《Nature Protocols》杂志上,报告了一种利用基因组编辑技术的替代基因敲入方法的精简实验方案。这一创新方法被称作为PITCh系统(精确整合到靶染色体,Precise Integration into Target Chromosome)。 基因敲入是通过用一种基因替换另一种基因,以便在体内测定它们是否具有相同的功能,或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗目的的技术。基因敲入通常是通过共同导入可编程核酸酶和单链寡核苷酸或是包含左右同源臂的靶向载体,诱导同源重组(HR)依赖性的基因添加来实现。 尽管同源重组介导的基因敲入能够精确插入大的DNA片段。构建靶向载体往往很费力,且在大多数培养细胞和生物体中同源重组活性都相对较低。这一问题为同源重组介导的基因敲入......阅读全文

基因敲入的概念

基因敲入(gene knock in)是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种,一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程;另一种是定点敲入,即

CRISPR新改良实现高效基因敲入

  细菌一直在与病毒或入侵核酸进行斗争,为此它们演化出了多种防御机制,CRISPR/Cas适应性免疫系统就是其中之一。该系统能在小RNA分子(crRNA)的引导下,靶标并沉默入侵者的遗传物质。   发现CRISPR系统之后不久,人们就开始用它来进行特异性的基因编辑。这种基因编辑技术更容易操

基因敲入的概念和基本方式

基因敲入(gene knock in)是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达的技术。 基因敲入有两种,一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程;另一种是定点敲入,

基因敲入的定义和方式介绍

基因敲入(gene knock in)是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种,一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程;另一种是定点敲入,即

基因敲入技术介绍和技术分类

基因敲入(gene knock in)是利用基因同源重组,将外源有功能基因(基因组原先不存在、或已失活的基因),转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组,插入到基因组中,在细胞内获得表达的技术。基因敲入有两种,一种是原位敲入,即在原基因敲除的位点插入新基因,它是基因敲除的逆过程;另一种是定点敲入,即

新技术推动CRISPR、TALEN广泛介导基因敲入

  使用一种新型的基因敲入(knock-in)技术,来自日本的科学家们将外源基因有效地插入到了人类细胞和包括蚕及青蛙在内的动物模型中。这种策略不仅能够在培养细胞中,还可以在各种生物体中普遍实现基因敲入。相关研究结果发布在近日的《自然通讯》(Nature Communications)杂志上。  当前

新“基因魔剪”按需敲入长DNA序列

北京11月27日电 据最新一期《自然·生物技术》发表的一项研究,在CRISPR基因编辑系统的基础上,美国麻省理工学院研究人员设计了一种新工具,可以更安全、更高效的方式剪除有缺陷的基因并用新基因替换它们。 使用这个系统,研究人员可将长达36000个DNA碱基对的基因传递给几种类型的人类细胞,以及小

全新CRISPR/Cas9基因敲入系统助力肝癌建模

  最近发表在开放获取期刊《基因组医学》(Genome Medicine)上的一项研究,报道了一种建立肝癌小鼠模型的新方法,即利用CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。  研究的通讯作者、麻省大学医学院RNA疗法研究所的王文说:“为了更好地理解肿瘤生物学、开展临床前研究以及

科学家首次获得基因敲入的食蟹猴

获得基因敲入的食蟹猴。中科院神经所供图  中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心、神经科学国家重点实验室杨辉研究组与苏州非人灵长类研究平台孙强团队合作,利用了一种以同源臂介导的末端接合(HMEJ)为基础的基因敲入策略,在世界上首次获得了基因敲入的食蟹猴。近日,该成果在线发表于《细胞研究》

世界首例ROSA26基因敲入猪模型诞生

  近日,中科院广州生物医药与健康院研究员赖良学与美国密西根大学教授王忠合作,获得了世界首例ROSA26定点基因敲入猪模型。据称,该研究成功地实现了猪重组酶介导的基因交换,从而解决了一直困扰转基因猪研究领域效率低下、表型不确定的问题。相关研究成果日前在线发表于《细胞研究》。   转基因猪

Nature子刊:TALEN/CRISPR介导的新型替代基因敲入技术

  来自广岛大学的专任讲师Tetsushi Sakuma、Takashi Yamamoto教授,专任副教授Ken-Ichi T Suzuki及同事们在《Nature Protocols》杂志上,报告了一种利用基因组编辑技术的替代基因敲入方法的精简实验方案。这一创新方法被称作为PITCh系统(精确整合

将致癌基因敲入小鼠DNA中 “基因魔剪”让癌症建模更准确

  据开放获取期刊《基因组医学》16日公开的一项研究,美国科学家报告了一种建立癌症小鼠模型的新方法——利用有“基因魔剪”之称的CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。该方法以前所未有的高效,满足了快速准确建立动物模型的需求。   研究通讯作者、麻省大学医学院RNA疗法研究所的

CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定方法

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组DNA为模板进行PCR,并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小,根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定,今天我们就开始学习CRISPR/

张锋创立的Editas公司发布基因敲入技术,助力开发新疗法

撰文 | 王聪编辑 | 王多鱼排版 | 水成文尽管CRISPR-Cas基因编辑技术在基因敲除方面取得了重大突破,并深刻改变了基因编辑领域乃至整个生命科学的研究模式。但CRISPR-Cas基因编辑技术通常是以破坏DNA的方式实现基因敲除的效果,该技术在实现高效基因敲入方面仍然面临重大挑战。为了解决这一

CRISPR/Cas9基因敲入鼠鉴定方法之Southern Blot与PCR

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组DNA为模板进行PCR,并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小,根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定,今天我们就开始学习CRISPR/C

科学家在植物中实现超长基因片段高效精准无赘敲入

  5月17日,国际学术期刊《自然-通讯》(Nature Communications)在线发表了中国科学院上海植物逆境生物学研究中心朱健康研究组题为CRISPR/Cas9-mediated gene targeting in Arabidopsis using sequential transfo

世界首例亨廷顿舞蹈病基因敲入猪在中国诞生

“世界首例亨廷顿舞蹈病基因敲入猪”研究团队。中科院广州生物医药与健康研究院研究员赖良学介绍研究成果。暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院教授李晓江介绍研究成果。科研人员展示“世界首例亨廷顿舞蹈病基因敲入猪”。  北京时间3月30日凌晨,国际权威学术期刊《细胞》在线发表生物学领域的一项重大成果:以广东科学

基因敲落的概念

中文名称基因敲落英文名称gene knockdown定  义阻止靶基因转录产物的正常剪接或翻译,从而使靶基因功能部分丧失或降低的实验技术。应用学科遗传学(一级学科),发育遗传学(二级学科)

基因敲减技术介绍

基因敲减(Gene knock-down)是指通过降解具有同源序列靶基因的mRNA,达到阻止基因表达的作用。

什么是基因敲减?

基因敲减(Gene knock-down)是指通过降解具有同源序列靶基因的mRNA,达到阻止基因表达的作用。

Cell子刊介绍一种高效精确的基因敲入技术:Tild-CRISPR

  一组研究人员设计了一种新型基因靶向整合策略Tild-CRISPR,它可以在小鼠和人的细胞中实现高效精确的基因敲入。Tild-CRISPR不仅适用于高效地构建小鼠动物模型,同时为研究体内的基因功能以及开发潜在的基因疗法提供新思路。  这一研究成果公布在Developmental Cell期刊上,题

基因敲减的功能作用

基因敲减(Gene knock-down)是指通过降解具有同源序列靶基因的mRNA,达到阻止基因表达的作用。

以自然为师 "基因敲高"获突破

  近日,中国农业大学植物保护学院姜临建与青岛清原化合物有限公司李华荣、中科院分子植物科学卓越创新中心朱健康、贵州大学宋宝安等研究人员开展合作,报道了一种“基因敲高”的新策略。11月15日,相关论文发表于《自然—植物》。  研究人员表示,这项研究进一步深化了对基因编辑工具的认知和理解。基因编辑创制基

基因敲减的概念和功能作用

利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA,从而阻断体内靶基因的表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。它不同于基因敲除(Gene knock-out)使目标基因永久性的表达沉默,而是通过降解具有同源序列靶基因的mRNA,达到阻止基因表达的作用,因此被形象地称为“基因敲低”(Gene knock-

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

敲降斑马鱼基因的方法学比较

一、基因敲降的前期准备工作相同1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,进行PCR扩增,确认目标基因

朱健康等团队:师法自然 “敲高”基因获突破

  除了基因敲除、碱基编辑,提升基因功能是否还有其他的全新路径?中国农业大学植物保护学院姜临建与青岛清原化合物有限公司李华荣、中科院分子植物科学卓越创新中心朱健康、贵州大学宋宝安等研究人员开展合作,报道了一种“基因敲高”的新策略。11月15日,相关论文发表于《自然—植物》。  研究人员表示,这项研究

Veritas入华抢占基因测序市场

  随着科学家对疾病与基因之间关系的深入研究,越来越多的生物技术公司意识到了基因检测将成为一个潜力巨大的市场。在美国,包括谷歌在内的互联网巨头都已经纷纷涉足这一领域。而中国——这个拥有13亿人的新兴市场,也顺理成章的成为了众多生物信息学公司的必争之地。最近,波士顿的VeritasGenetics宣布

科学家建立工业产油微藻基因敲低技术

  微藻通过光合作用将二氧化碳、光和水转化为油脂,因此,作为一种潜在的清洁能源生产和二氧化碳高值化方案,工业产油微藻受到了广泛关注。然而,藻类高效遗传工具的匮乏,一直是工业产油微藻分子育种和光驱固碳合成生物技术的重要瓶颈之一。近日,中国科学院青岛生物能源与过程研究所与中国科学院水生生物研究所合作,以