免疫荧光常见问题总结
1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会：（1）选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，secondary antibodies则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。（2）我的做法是两种primary antibodies同时孵育，然后两种secondary antibodies同时孵育。抗体浓度、孵育时间要认真摸索，我感觉primary antibodies 4度孵育过夜比较好，背景比较干净。......阅读全文
免疫荧光常见问题总结
1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双
蛋白纯化常见问题总结
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
Western－Blot常见问题总结
Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与或标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电
蛋白纯化常见问题总结
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
蛋白纯化常见问题总结（二）
3)Sephadex G-25(medium)柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗?若有，一般对盐浓度限度如何?大家别客气，除盐对于浓度应该也是有一定的限制的，同样的样品盐浓度高的自然要比浓度低的要在柱子上走的峰要宽些，相对需要的柱子的分辨率也要高点，但是在正常的范围如1-2M应该影响不大，不过要除得
蛋白纯化常见问题总结（一）
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
免疫荧光技术常见问题与解答
1、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项？ 参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是： （1）选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-F
蛋白质纯化常见问题总结
蛋白质纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白质纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我
蛋白纯化系统化常见问题总结
使用Blupadstart蛋白纯化系统过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。 1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，
蛋白纯化实验一些常见问题总结
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
蛋白纯化实验一些常见问题总结
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
移液器使用常见问题及解决方法总结
移液器，对于实验室人员而言，几乎是都要在实验室中用到的，并且在使用的过程中，也会遇到一些列问题。 一、移液器使用常见问题： A.活塞/吸头 泄漏 B.吸头不适合移液器 C.二次使用吸头 D.移液器吸头没有碰到容器壁 E.湿度差异 F.没有
冷冻干燥机干燥前后常见问题总结
1 喷瓶现象 喷瓶是影响冻干制剂外观质量的重要因素，喷瓶的原因主要在三个方面，药液中的气泡、预冻、干燥速率。 制品在分装过程中，当灌装机溶液分注入瓶中时，由于液体流速较快，形成一定量的气泡存在于瓶内液体中，此时应将装瓶液体放置一定时间让气泡充分逸出，否则旗袍被冻结在制品内部，当升华过程抽
SSCP检测SNP原理，步骤及常见问题总结整理
SSCP原理：sscp称为单链构象多态性，它是基于DNA构象来检测PCR产物单链碱基微小差异的方法，因其检测敏感，快速和所需装置简便而在分子生物学各个领域广泛应用。但该方法的试验结果受多种因素的影响，如：PCR产物，温度，电压，PAGE胶的浓度和交联度等，因而重复性比较差。因此在做SSCP时要注意各
SSCP检测SNP原理，步骤及常见问题总结整理
SSCP原理：sscp称为单链构象多态性，它是基于DNA构象来检测PCR产物单链碱基微小差异的方法，因其检测敏感，快速和所需装置简便而在分子生物学各个领域广泛应用。但该方法的试验结果受多种因素的影响，如：PCR产物，温度，电压，PAGE胶的浓度和交联度等，因而重复性比较差。因此在做SSCP时要注意各
天平使用常见问题总结：告别“假天平”，远离称量雷区
天平在使用过程中除了人为因素外，以下八大环境因素也会影响其称量精准性，需要特别留意。 就天平使用的常见问题小编总结以下解决方法，让你远离称量雷区，轻松应对精准称量困恼。 1、空气流动因素 解决方法 -避免空气流动 -使用防风罩 -使用网格称盘 2、温差因素 解决方法 -让天平
天平使用常见问题总结：告别“假天平”，远离称量雷区
天平在使用过程中除了人为因素外，以下八大环境因素也会影响其称量性，需要特别留意。就天平使用的常见问题小编总结以下解决方法，让你远离称量雷区，轻松应对称量困恼。1、空气流动因素解决方法-避免空气流动-使用防风罩-使用网格称盘2、温差因素解决方法-让天平在实验室稳定一段时间-把样品放置在天平附近3、震动
来自耶鲁大学的PCR常见问题的精辟总结
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. COMPONENTVOLUMEFINAL CON
免疫组化的经验总结（1）－常见问题
免疫组织化学的概念： 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。免疫组化实验所用的组织和细胞
ELISA中常见问题及解决方法经验总结
【摘要】：ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。相关专题 ELISA免疫实验技术 e
免疫荧光
Immunofluorescence Technique (Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells Immunofluorescence Protocol (Walter Steffen)Methanol fixationForma
RNAi总结
RNA干涉（RNAi）是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。过去几年中，科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中，在机体防御病毒入侵和转座子沉默效应中起着重要作用。近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义
贫血总结
缺铁性贫血：一铁的代谢：1.铁的分布：功能状态铁、贮存铁2.铁的来源和吸收：需要20～25mg/d，大部分来自衰老的红细胞破坏，食物中摄取1~1.5mg/d可维持铁的平衡3.铁的运输：高铁与转铁蛋白结合，运到各组织，通过胞饮进入细胞，在胞内再次还原为亚铁4.再利用和排泄：RBC正常寿命为120天5.
免疫荧光技术
免疫荧光技术是标记免疫技术中发展最早的一种．它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记抗体获得成功。经过几十年的发展，该技术已相当成熟。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的
免疫荧光技术
免疫荧光技术1） 直接法1．标本经固定后，PBS洗涤3×3分钟。2．加荧光素标记的抗体，湿盒内37℃孵育50分钟。3．PBS洗涤3×3分钟。4．0.1％伊文氏兰复染。5．PBS洗3次，蒸馏水洗2次，每次3分钟，以除去NaCl结晶。6．缓冲甘油封片，镜检。 2） 间接法1．标本固定后，PBS洗涤3
免疫荧光简介
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
间接免疫荧光
中文名称间接免疫荧光英文名称indirect immunofluorescence定 义直接免疫荧光技术的改进。待检细胞首先用未标记的抗体处理，使之与特异的抗原形成复合物，然后再用抗抗体的荧光标记抗体着色，即可检测出特异抗原在细胞中的存在部位，具有荧光增强效应。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞
免疫荧光概述
免疫荧光（immunofluorescence technic）Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescentantibodytechnique）。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫荧光技术
基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。试剂与仪器l 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：