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双向电泳(twodimensionalelectrophoresis,2DE)5

六、第二向 SDS-PAGE1.[基本原理]蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂消除电荷、形状等因素的影响,使电泳迁移率只取决于分子的大小,就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年,Shapiro等发现在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂和强还原剂后具有这种作用并建立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。之后,Weber,Glossmann和Douglas等人进行了多次改进,已显示出了在分离、鉴定和纯化蛋白质方面的优越性。SDS(十二烷基硫酸钠)是一种阴离子还原剂,作为变性剂和助溶性试剂,它能够断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构。强还原剂,例如β-巯基乙醇(β-mercapto ethanal)和二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)则能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂,不易再......阅读全文

蛋白质组技术的研究进展

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信息仅

常用电泳法

1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。2、纸电

常用电泳法

 1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检

Sapphire双模式多光谱激光成像系统在抗体药研发中的应用

  全球范围内,生物药,尤其是抗体类药物,经过多年的基础研究和技术积累,已经开始迸发其生命力,成为药物领域中最有活力和前景的一个分支。在全球范围已经获批上市的抗体类抗体药至少有80多个,在新冠肺炎抗体药研发中, 现在现已确立了7个抗冠状病毒靶点,同时也是药物筛选靶点。包括:(1) 病毒配体Spike

蛋白质组最新研究进展

  蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。 在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低,并且存在多种非蛋白质成分,如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物,使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切,传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA